Classical pathway haemolytic assays

Protocol

1. 将绵羊红细胞离心（100xg, 5min），使用DGVB²⁺ Buffer将洗绵羊红细胞三次。
2. 使用DGVB²⁺ Buffer将绵羊红细胞重悬至10⁹ cells/ml。
3. 将重悬的绵羊红细胞以体积比1：1的方式与溶血素（1：3000稀释在DGVB²⁺ Buffer中）在37℃混合孵育20min（缓慢摇晃）。
4. 使用DGVB²⁺ Buffer将绵羊红细胞洗两次。
5. 使用DGVB²⁺ Buffer将绵羊红细胞重悬至8x10⁷ cells/ml。
6. 在绵羊红细胞中加入人类血清至0.125%人类血清浓度，在37℃混合孵育1h。
7. 用分光光度法测定血红蛋白释放量(405 nm)，此则为溶血量。

材料

1. Veronal buffer(pH 7.3):
   0.15mM CaCl₂
   141mM NaCl
   0.5mM MgCl₂
   1.8mM Barbitone sodium
   3.1mM Barbituric acid

2. DGVB²⁺ Buffer:
   2.5 mM Veronal buffer (pH 7.3)
   70 mM NaCl
   140 mM glucose
   0.1% gelatin
   1 mM MgCl₂
   0.15 mM CaCl₂

3. 绵羊红细胞

4. 溶血素

5. 人类血清

参考资料

1. Classical Pathway of Complement System
2. Scabies Mite Inactivated Serine Protease Paralogs Inhibit the Human Complement System