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大片段文库一般指片段长度1k以上的文库。
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测序机器是选择小段的片段测序的。(illumina 为150bp)
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文库构建是随机的。
大片段测序目的
- 获取reads之间的物理距离关系
大片段测序问题
- 无法PCR 太长的片段
- 只测序很短的序列,合成大片段浪费
应对方式
对于这样的问题,illumina 测序采取了特别的方式。
相比于小片段文库序列,大片段序列会进行环化处理(并对末端进行生物素标记)。
![](https://img.haomeiwen.com/i19725743/b9befe7d2cc5053b.png)
![](https://img.haomeiwen.com/i19725743/124f1c8dd97a2c5a.png)
接着会对这段环状片段再进行打断。
接下来的处理就和小片段处理类似了。
![](https://img.haomeiwen.com/i19725743/5b512ed7f3057285.png)
小/大 片段文库
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小片段文库read 为pairend,大片段文库read 为matepair。
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两条序列方向不同。
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