一、材料准备
标记好的标签;
2 mL螺口管(外螺旋)含MoBioBuffer 750μL;
无菌采样拭子;
无菌SCF-1溶液用于采样前湿润拭子(50mMTris buffer [pH 7.6],1 mMEDTA [pH 8.0],0.5%Tween-20);
拉链塑料袋用于收集采样管;Ø便携式冰盒(含冰块)。
二、皮肤情况调研
1.受试者排除标准如下:
①受试者前七天,面部、颈部、手臂、或手上局部使用过抗生素或类固醇类药物。(当受试者满足抗生素或类固醇使用的排除时间段时,可以推迟筛选和取样);
②痤疮不能出现在脸部、胸部、背部和肩部;
③头皮、面部、手臂、前臂或手上带有多处水泡、脓包、烫伤、脓肿、糜烂或溃疡;
④单个水泡、脓包、烫伤、脓肿、感染、溃疡、结痂、切口、裂缝或粉红斑/色素沉着斑或斑块距离取样点4cm以内的;
⑤多个粉红斑/红色鳞斑/斑块在身体的任何地方(牛皮癣或湿疹);
⑥手掌双侧和(或)脚掌出现均匀增厚的死皮,开裂和过分干燥;
⑦每天使用不了解成分的非处方去头屑洗发水长达2周的;
⑧传播性皮疹(在多个身体部位出现或延伸遍及身体大部分区域)。
2.检测条件:
皮肤检查应在良好的照明条件下进行,包括局部皮肤(整个身体)的一般调查和采样区域的详细检查。
3.检测额外标准:
①通过目视检测仔细检查后耳皱纹(左右耳后)和双臂两肘的肘窝(内肘);
②个体带有任何单个水疱,脓疱,烫伤,脓肿,感染,溃疡,结痂,切口,裂缝或粉红斑/色素沉着斑或斑块,可见皮肤损伤,距离采样部位超过4厘米的仍被认为有资格纳入研究。
三、样本采集方法
说明:
①采集所有样本应使用无菌技术(详见附录)。
②穿戴的一双无菌乳胶手套仅用于采集一位受试者的皮肤样本,并且注意避免手套污染。
③若戴手套的手用于拉伸皮肤进行采样并与采样区域接触,在下一个位点采样前,必须更换手套。
样本采集顺序:
①耳后皱纹(耳后,左、右两侧保持分开采集)
②肘窝(内肘,左、右两侧保持分开采集)
③鼻前孔(左、右两侧可结合采集)
注: 采样过程让受试者舒适平躺更加有利。
1. 耳后褶纹
耳后褶纹:指开始于耳朵的顶部连接面部并延伸到耳垂连接到面部的地方。
①皮肤样本采集采用样本采集拭子,并采用SCF-1溶液润湿。
②要触及到该区域,请用一只手向前折叠耳朵以露出折痕。
③另一只手,保持拭子的轴平行于皮肤表面,沿着逆向皱纹大约50次,并施加稳定的压力(大约30秒完成50次擦拭)。
④拭子头部插入到收集管中,将棉签的头部从手柄处无菌切割,并且将管帽拧回到适当位置。
注:
为了获得最佳的皮肤表面标本,采样技术的关键点:使用湿润的棉签,施加稳定的压力,以及摩擦的一致性(在采样点30秒内来回50次)。
左右两侧分别采样,并分别标记和保存。将管子收纳于拉链自封袋并置于冰上。2小时内送达实验室保存。
2.肘窝(内肘)
肘窝(内肘):指手臂和前臂的接合处正好位于内肘的弯曲处。
①皮肤表面样本采集采用样本采集拭子,并用无菌SCF-1溶液湿润。
②用一只手拉伸肘部皮肤,另一只手,握住拭子,使轴平行于皮肤表面,并沿着肘前皱纹前后摩擦拭子约50次,施加稳定的压力(约30秒完成50次擦拭)。
③将拭子插入管子中,拭子头部插入到收集管中,将棉签的头部从手柄无菌切割,并且将管帽拧回到适当位置。
注:
为了获得最佳的皮肤表面样本,采样技术的关键:使用湿润的棉签,施加稳定的压力,以及摩擦的一致性(在采样点30秒内来回50次)。
左右两侧分别采样,并分别标记和保存。将管子收纳于拉链自封袋并置于冰上。2小时内送达实验室保存。
3.鼻前孔
①采用无菌拭子,采用扭曲的动作,轻轻擦拭鼻孔黏膜表面,每个鼻孔采用同一个拭子在相同区域擦拭两次。
②左、右侧作鼻孔样本作为组合样本进行取样和汇集,并做好标记。
③擦拭后立即将棉签置于750μLMoBioBuffer中旋转,将拭子海绵在管壁多次积压20s,确保将细菌转移至溶液中。
将样本采集管放入拉链自封袋中并至于冰上,约2小时内转移至实验室进行处理。
四、附 录
无菌技术
原则:
所有样品的收集和处理采用无菌技术。
每个SOP中所有收集的材料保证清洁和无菌或确认无菌后再购买和使用。
以下是无菌技术的建议。
无菌技术操作适用于所有样本采集SOP。
无菌技术—准备样本采集管
1)无菌用品包括(但不限于)管子、枪头、MoBiobuffer和SCF-1缓冲液
2)如果管子要填充满,MoBioBuffer和SCF-1将分装在层流罩。
无菌技术—受试者样本采集
1.按照当地安全委员会和/或机构政策的所有安全准则处理生物样本。手套、安全眼镜或面罩和实验外套必须在分装血清全程穿戴。在收集任何生物样本时,应注意预防措施,包括至少戴手套。
2.当在采样过程中,手我样本收集管时,应注意保持手套干净,以免造成收集管内外交叉污染。
3.样本采集过程中,使用干净的一次性手套。
a)当采集皮肤和鼻腔样本时,在采集鼻腔样本前采集四个皮肤位点。只要拉伸皮肤时,不接触采样区域,采样员可以带着一副手套完成所以皮肤位点的样本采集。一旦与采样区域发生接触,应更换完手套后进行下一点皮肤样本采集。
b)研究人员可以在同一个受试者口腔使用一副手套完成不同口腔位点样本的采集。同样地,同一个受试者采集三个阴道样本时,也不需要更换手套。
无菌技术—样本检测
无菌用品包括(但不限于)管、枪头、所有的缓冲器/试剂。
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