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人T淋巴细胞Jurkat细胞培养要点

人T淋巴细胞Jurkat细胞培养要点

作者: HyCyte海星 | 来源:发表于2022-12-28 11:06 被阅读0次

    人白血病 T 淋巴细胞 Jurkat, Clone E6-1 由 Schneider 建立,来源于一 个 14 岁的男孩的外周血。该克隆是 Jurkat-FHCRC 细胞株的一个克隆(Jurkat 的一个衍生株),经佛波酯(phorbol esters)和外源凝集素(lectins)或抗 T3 单克 隆抗体(需要两种物质共同诱导)诱导后可产生大量 IL-2。

    Jurkat细胞是一种悬浮细胞,是用于研究急性T细胞白血病,T细胞信号传导以及易感病毒进入的各种趋化因子受体,特别是HIV的表达的永生化人T淋巴细胞系。它在生物学研究上具有十分广泛的应用,比如应用Jurkat细胞研究核糖核酸酶P的M1-RNA,探讨抗MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。

    Jurkat细胞培养注意要点

    ➊ Jurkat细胞为悬浮生长,理想的状态是均匀的成团生长;

    ➋ Jurkat细胞有密度依赖性,细胞密度低时,生长较慢,培养密度维持在4 ~8×10^5 /mL为宜;超过1.0 ×10^6 /mL则需要传代。

    ➌ Jurkat细胞对机械力较敏感。正常培养时,应尽量避免吹打力道过大。暴力吹打会使细胞分化和死细胞增加。

    ➍ 血清质量差异可能引起细胞状态变化,建议选用高质量的胎牛血清。

    ➎ 如生长过程中观察到细胞团中心发黑,代表细胞团过大,这个时候可以轻柔的吹散较大的细胞团,但是不用强行吹散成单个细胞。

    Jurkat细胞换液

    ➊ 补液法:培养基变黄时可补加适量(1~2mL)新鲜培养基,补加1-2次之后,用离心的方式全部换液,离心1200rpm (约250g)3分钟。

    ➋ 半换液法:以T25瓶子为例,瓶子里装有5mL培养基。竖起瓶子静置一段时间,待细胞沉底,小心吸出2.5mL的培养基,转移到离心管,离心1200rpm (约250g)3分钟,检查有没有沉淀,以免损失细胞;原瓶补充2.5mL新鲜培养基,离心管里若有细胞,则用新鲜培养基重悬后放回原瓶。

    ➌ 如果换液后第二天培养基就变得很黄,同时镜下检查未污染,说明细胞密度大,应该传代。

    Jurkat细胞传代

    ➊ 摇晃培养瓶,把细胞摇匀,均分到两个瓶子里,每瓶再补充等量培养基。

    ➋ 离心法:离心后计数,按照40-50万细胞/mL的密度接种到T25瓶里,瓶中培养基量以5mL为宜。不方便计数时,按1:2比例传代。

    ➌ 死细胞或细胞碎片较多的情况下,建议用离心法传代,离心转速可适当降低(推荐800~1000rpm或160~200g)。

    Jurkat细胞冻存

    ➊ 由于Jurkat是悬浮细胞,更易受到冻存影响,建议加大冻存密度,大约200万-300万/mL为宜,以提高复苏存活率。

    ➋ Jurkat细胞对冻存温度比较敏感,建议冻存后立即转入-80℃冰箱,长期保存应放在液氮罐中。

    ➌ 经测试,Jurkat使用非程序降温冻存液的复苏存活率高于程序降温冻存液,推荐使用HyCyte™一步冻存液(GUCP-R201)。

    Jurkat细胞复苏

    ➊ Jurkat细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态,建议复苏后48小时内不要进行操作。

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