2019年10月,河北省某养牛场发生腹泻疫情,部分牛出现低烧、食欲减退和轻度呼吸道症状,采集粪便,用MDBK细胞对粪便种病毒进行分离培养,得到病毒HB19-1。通过高通量测序以及进化树分析发现该病毒为BEV毒株,通过动物模型检测它的致病性。
发表期刊:Viruses ( IF:5.048)
发表时间:2021年11月
合作单位:南京农业大学兽医学院
样本类型:牛肾细胞
实验方法:RNA病毒测序&电镜观察&qRT-PCR&动物实验&复制动力学&组织病理学&间接免疫荧光实验
主要结论
1. 分离培养得到HB19-1
采集18份粪便样本,加入缓冲液,离心,过0.22 m孔滤膜,MDBK细胞对滤液进行分离培养,获得HB19-1。
2. HB19-1身份的确定
通过全基因组测序得到病毒的核酸序列,推测出其氨基酸序列,通过与数据库中其他病毒氨基酸序列对比,确定HB19-1是具有典型细胞病变效应的BEV毒株。在GenBank数据库中BEV株的基因组数据,进行系统发育分析,发现HB19-1与猪肠病毒(PEV)株具有较近的遗传关系。
图 HB19-1毒株的系统发育分析图3. 动物模型检测其致病性
HB19-1接种健康3日龄新生ICR小鼠构建动物模型,接种组和对照组均未见明显临床症状。通过RT-qPCR检测HBI9 -1在小鼠体内的表达情况,发现病毒RNA在心脏、肺、肾、脑、肠和肌肉组织中均可检测到,在肺和肌肉组织中含量最高。光镜观察HE染色后的组织切片,其结果与qRT-PCR结果一致。
图 病毒RNA的检测和量化 图 3 d后的组织病理学分析4. 农场BEV感染的流行病学调查
抽样调查,通过RT-PCR和间接免疫荧光实验(IFA)发现,牛群中普遍存在BEV感染,且腹泻样本中BEV感染的比例高于无症状样本。
小结:本文分离并鉴定出一株引起牛腹泻的BEV病毒—HB19-1株,虽然在动物试验中没有表现出典型的疾病症状,但观察到肺、肠和肌肉组织出现明显的病理损伤,建议对动物的BEV感染进行持续监测,以控制这一潜在危险病毒的传播。
参考文献:
Isolation and Identification of Type F Bovine Enterovirus from Clinical Cattle with Diarrhoea
https://doi.org/10.3390/v13112217
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