本文选自Nature，https://doi.org/10.1038/s41586-020-2015-4，喜欢的朋友可以自行下载阅读。
废话不说，上图。
nature的文章很难懂啊 。上个summary一起看看说了什么玩意儿。第2组固有淋巴样细胞(ILC2s)调节哺乳动物组织的炎症和免疫。虽然在这些组织的肿瘤中发现ILC2s3，但它们在癌症免疫和免疫治疗中的作用尚不清楚。在这里，我们显示ILC2s浸润胰腺导管腺癌(PDAC)以激活组织特异性肿瘤免疫。白细胞介素-33(IL33)可激活小鼠原位胰腺肿瘤中的肿瘤ILC2s(TILC2s)和CD8+T细胞，但不能激活异位皮肤肿瘤，从而限制胰腺特异性肿瘤的生长。静息和激活的TILC2表达抑制性检查点受体PD-1。抗体介导的PD-1阻断可以解除ILC2细胞固有的PD-1抑制，从而扩大TILC2，增强抗肿瘤免疫，增强肿瘤控制，确定激活的TILC2为抗PD-1免疫治疗的靶点。最后，大多数人的PDAC中都存在PD-1+TILC2和PD-1+T细胞。我们的结果证明ILC2s是PDAC免疫治疗的抗癌免疫细胞。更广泛地说，ILC2是肿瘤免疫的组织特异性增强剂，可以增强抗PD-1免疫疗法的疗效。由于ILC2s和T细胞在人类癌症中共存，并共享刺激和抑制途径，因此共同靶向抗癌ILC2s和T细胞的免疫治疗策略可能会得到广泛应用。
为了研究ILC2s在癌症中的作用，作者分析了未选择的原代人类PDAC中的肿瘤浸润性淋巴细胞，但是，没有发现免疫细胞谱系标记，但是发现 ILCs (CD25 and CD127) and ILC2s (IL33 receptor (ST2, also known as IL1RL1 or IL33R) and GATA3)marker。
DRAQ7其实是一种做流式的染料， Lineage 1 cocktail: CD5, CD11b, CD11c, CD16, FcεR1. Lineage 2 cocktail: CD3, CD19, TCRα/β. 第二行的图其实是个对照作用。
扒一扒这个lineage到底是个什么玩意儿。说白了就是一系列marker的集合，
流式对照至少有 5 种：生物学对照，空白对照，同型对照（Isotype control），补偿对照（也叫单阳性对照）和 FMO 对照，主要目的是为了避免出现的假阳性或假阴性结果。荧光减一（FMO，Fluorescence minus one）对照：如果只用到两种颜色的话，这个对照可以用单阳性对照代替，如果三种以上颜色的话，就需要再设置 FMO 对照来评估其他荧光染料的干扰和补偿本底，帮助正确设置阳性门。其实很玄幻，我也不清楚。
作者进一步发现TILC2在来长期PDAC幸存者的“热”肿瘤(富含CD8+T细胞)中富集。此外，较高的TILC2与较长的生存期相关
ILC2激活细胞因子IL33在肿瘤中的RNA表达较高，与较长的生存期相关，其他ILC激活因子并没有相关性。
这个CYT又是什么，tumour cytolytic index ，大神有没有来说一说的，估计也加入了细胞毒性药物看看细胞溶解情况
以上表明IL33和TILC2激活了人类PDAC的抗肿瘤免疫。
接下来，作者在KPC和PDAC原位小鼠模型驱动的小鼠的肿瘤中寻找ILC，在两个模型中均找到了类似于人PDAC的TILC2s，小鼠ILC2在肿瘤中的频率增加，但在邻近器官中没有增加
ILCs were identified as lineage− NK1.1− CD25+ CD127+， ILC2s were identified as lineage−NK1.1− CD25+ ST2+ cells
在RAG2−/−小鼠中通过靶向淋巴细胞抗原CD90.2被清除，因此，ILC2是在小鼠和人PDAC中局部扩张的保守细胞。
Changes in non-ILC cell frequency in Rag2−/− PDAC mice treated with anti-CD90.2 or isotype antibodies.
为了识别 expansion TILC2的信号，作者发现IL33是PDAC和KPC小鼠12中肿瘤中表达最高的ILC激活细胞因子。IL33在人和小鼠PDAC中都是异质性表达的
在肿瘤内的髓样细胞中表达最多。
为了了解IL33和TILC2在PDAC免疫中的作用，作者研究了IL33High PDAC小鼠TILC2对IL33的依赖性，对于IL33+/+鼠有更高的TILC2数量、频率(图1f，扩展数据图42f)和细胞因子产生
在RAG2−/−PDAC小鼠加入重组IL33可以expansion ILCs，但是，在RAG2−/−γc−/−PDAC小鼠没有expansion，Collectively, these data show that IL33 expands TILC2s in PDACs。
由于ILC2s具有组织特异性表型，作者假设TILC2s对PDAC免疫具有组织特异性效应。为了测试这一点，比较了IL33缺乏对胰腺和皮下肿瘤生长的影响（pancreatic TILC2s express ST2 whereas skin TILC2s do not）
与il33+/+小鼠相比，接受原位pdac的il33−/−小鼠肿瘤较大，肿瘤生长加快，生存较差。
相比之下，皮下PDAC的小鼠没有表现出IL33依赖的表型。
然后，通过回交使小鼠有相同的遗传背景，在同窝的小鼠中，IL33-/-具有更大的肿瘤，表明并非微小基因错配形成的。（大佬的世界我不懂）
这些抗肿瘤作用依赖于宿主造血细胞产生的IL33，因为移植了IL33−/−骨髓的嵌合体小鼠比对照小鼠有更大的肿瘤。
这个操作我看过很多次了，学习了。
用原位PDAC对来自Il33+/+和Il33−/−小鼠的纯化的CD45+瘤内免疫细胞的RNA序列分析显示：来自Il33−/−小鼠的PDAC免疫细胞具有T细胞激活和MHCI类抗原处理的转录特征减弱。这表明Il33−/−PDAC小鼠在T细胞激活和MHCI类抗原处理方面可能存在缺陷。
Il33−/−小鼠的原位PDAC的激活的肿瘤浸润CD8+T细胞的频率较低，并且引流淋巴结(DLN)但不是远处淋巴结的中央记忆CD8+T细胞(Tcm)减少，其他免疫细胞频率没有一致的变化。
然后，作者depletion T细胞，观察IL33+/+与IL-/-肿瘤的大小没有区别，在IL-/-的RAG-/-鼠中加入rhIL33并没有观察到肿瘤大小的差异。说明IL33是作用于T细胞发挥作用的。
来自IL33−/−和IL33+/+PDAC小鼠的原位肿瘤也具有相似的组织学以及胶原和成纤维细胞含量,并且rIL33在体外对肿瘤细胞没有影响。（这严谨性，WTF）
表明IL33对肿瘤或基质细胞没有直接影响。这些数据表明，IL33通过潜在地激活TILC2来激活CD8+T细胞，从而激活组织特异性癌症免疫。
接下来，作者通过对比表达CD8+T细胞排斥抗原卵白蛋白(KPC-OVA细胞)的KPC细胞在不同组织部位的排斥表型，检验IL33的组织特异性效应是否依赖于CD8+T细胞。70%的IL33+/+小鼠排斥原位kpc-OVA瘤，而IL33−/−小鼠的排斥反应为0%。相比之下，100%的il33+/+和il33-−/−小鼠排斥皮下kpc-ova肿瘤。
为了评估这种表型是否是由于ILC2缺乏和无效的CD8+T细胞启动所致，作者急性耗尽了ILC2，并检测了ICOS-T小鼠（白喉毒素耗尽了ILC2，而保留了ICOS+CD4+T细胞）DLN中抗原特异性的CD8+T细胞。
ILC2耗竭重现了il33−/−KPC的表型；原位kpc-ova肿瘤的小鼠显示出较低的肿瘤排斥率和较大的肿瘤体积，而皮下肿瘤的小鼠则没有差异。对缺乏ILC2的原位Kpc-OVA瘤小鼠的Tetramer analysis显示，在DLN和脾脏中，OVA特异性CD8+T细胞的频率降低，在DLN中CD8+Tcm细胞的频率降低.
因此，ILC2缺乏症部分表现为IL33缺乏症。虽然不能排除IL33对CD8+T细胞的直接作用，但在肿瘤内的CD8+T细胞上没有发现ST2的表达。综上所述，这些功能丧失的实验表明，IL33-TILC2轴启动了组织特异性CD8+T细胞的PDAC免疫。
今天先到这吧，太难了，读着太费劲，明天继续下部分，欢迎批评、指正。
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