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RNA干扰
又称为反义RNA(anit-senseRNA),是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-satrnddeNRA,dsRNA)诱发的同源mRNA高效特异性降解的现象。
其主要特点为具有高序列特异性、高效性、抑制作用迅速、作用的靶基因位点有选择性以及具有高稳定性。
RNA干扰是一项新兴的基因阻断技术,在肿瘤疾病、免疫机制与治疗等方面的研究上将被广泛应用。
RNA干扰的作用机制为:
在Dicer酶对生物体细胞内的双链RNA进行识别后,将其切割为21~23核苷酸长度的siRNA。
切割后得到的siRNA会与多种核酸酶发生发育,得到的复合物被称为RNA介导的静默复合物(RNA induced silencing complex, RISC),其中RISC中包含两种酶,即解旋酶与核苷酸内切酶。
解旋酶会使siRNA双链打开并使其处于活化状态,其中与靶序列mRNA互补的siRNA称为反义siRNA。
反义siRNA参与活化复合物的识别作用,并与其特异性互补的mRNA相结合,进而使核酸内切酶对靶序列的mRNA进行剪切而起调控功能。
近年来RNA干扰技术不断进步,尤其在肿瘤疾病的研究中做出了重大贡献,主要作用方式是在动物细胞中的使用和对肿瘤细胞进行siRNA的转染。
今后的研究方向主要为:癌基因与抑癌基因的敲除、有关肿瘤性疾病信号传导途径的研究、肿瘤免疫逃逸方面的研究、提高肿瘤对化疗及放疗的敏感性以及与病毒感染相关肿瘤的治疗。
研究意义
马立克氏病对家禽养殖业的危害非常严重,虽然因疫苗的使用和畜牧业的迅速发展得以控制,但接种疫苗并不能完全预防马立克氏病毒的感染、复制和水平传播。
近年来,对MDV致瘤性的研究进展迅速,miRNA在肿瘤疾病起到的调控作用也受到广泛关注,miRNA与肿瘤增殖、分化、迁移与侵袭及转移等过程密切相关,在各种生理过程或病理过程中都有非常重要的调控作用。
因此,研究与马立克氏病相关miRNA的功能与作用机制有助于解释马立克氏病致病发生的机制,并为马立克氏病的诊断以及控制马立克氏病发生提供新的生物学思路。
在本实验室的前期研究中,构建了马立克氏病攻毒样本群体,利用Solexa高通量测序测定MDV诱导的淋巴瘤中完整的miRNA表达谱,筛选出众多与马立克氏病肿瘤形成相关的miRNA。挑选gga-mi-181a为研究对象,同时验证它对MSB-1细胞的增殖和迁移均具有明显抑制作用, ANP32A的mRNA和蛋白表达均受gga-mi-181a的调控以及ANP32A是gga-mi-181a的下游靶基因。
在该结果的基础上,本研究以MSB-1细胞为样品,利用siRNA干扰ANP32A基因的表达,探究RNA干扰ANP32A的表达后对鸡马立克氏病肿瘤细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。
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