靶向蛋白质组学针对性地分析复杂样品中的特定肽段,既可以判断肽段或蛋白在样品中的有无(前提是信号高于检测限),又可以对不同样品中的肽段或蛋白进行定量,用于表达差异比较。靶向蛋白质组学可以看做是新一代基于质谱的western blot技术,但是比传统的WB更准确,且不需要抗体。
PRM
平行反应监测技术(Parallel reaction monitoring, PRM)是一种根据已知实测信息或质谱检测规律的假定信息对样品中的蛋白质进行靶向定量的技术。该技术主要应用仪器为Q Exactive系列质谱仪,首先以四极杆作为质量过滤器,特异性地选择与预先设定质荷比相同的肽段离子(母离子)通过,随后在高能碰撞池中碎裂母离子,最后通过Orbitrap分析碎片离子(子离子)得到肽段的二级质谱信息。四极杆的高选择性离子过滤与Orbitrap高分辨率测量技术的结合使得PRM技术有很高的特异性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干扰离子,提高了灵敏度。在确保数据质量的前提下,为了在一次分析中检测更多的蛋白质,可用预置PRM(Scheduled PRM, sPRM)的方法,这种方法需要知道每个肽段的保留时间信息,使得每个肽段只在其洗脱时间窗口内执行PRM检测,大大提高了检测效率,可同时检测上百种蛋白质。PRM技术是目前应用较广泛的质谱蛋白质靶向定量技术。
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PRM/MRM异同?
PRM技术与MRM技术很相似。
相同点:两种技术在一级质谱中筛选目标蛋白的原理是一样的,都是通过四级杆进行母离子的筛选从而进行下一步的检测。
不同点:MRM技术是在母离子碎裂后检测特异的子离子,通过母离子-子离子这种一一对应的离子对形式进行蛋白的定性定量; PRM技术是在母离子碎裂后通过高分辨检测器对全部子离子进行检测,这是PRM技术与MRM技术的不同。由于二级质谱检测模式的不同,在准确定性定量上,PRM技术比MRM技术更为准确,受到的离子干扰远小于MRM技术。
结论就是PRM技术更加简便,只需选择出母离子的质荷比,电荷数即可进行检测,不需要寻找准确的母离子-子离子对进行检测。
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