文献阅读:从HSC富集的BMC与ipsc诱导的胸腺上皮细胞共培养

题目：

Induction of γδT cells from HSC- enriched BMCs co- cultured with iPSC- derived thymic epithelial cells

作者：Naoki Hosaka

期刊：j cell mol med

IF:4.6

目的：

γδT细胞的临床应用受到体内丰度相对较低以及体外诱导其与造血干细胞（HSCs）分化的技术困难的阻碍。

材料与方法

1. HSC-eBMC 和 iTEC 的共培养以产生诱导淋巴细胞 （iLs）

HSC-eBMC （1 × 105）加入含有如上所述生产iTEC的培养皿中14天。将培养基改为新鲜的SF-3，补充有0.1 mM 2ME和20 ng / ml IL-2（PeproTech Inc.，美国新泽西州洛基希尔）和10 ng / ml IL-7（PeproTech Inc.）。对于缺乏iTEC的实验，HSC-eBMCs在10厘米的IV型胶原蛋白包衣培养皿中培养。在培养7、14和21天后收集含有iLs的培养细胞，通过70 μm尼龙细胞过滤器并进行分析。

2.自体骨髓移植 （BMT） 和 iL 的转移

受体CD45.2 C57BL / 6小鼠使用致命照射（8Gy）+137铯辐照器（伽马塞尔40反应器辐照器;MDS北欧国际，加拿大安大略省渥太华）。5小时后，将照射的小鼠静脉注射从供体CD45.2 C57BL / 6小鼠中分离的BMCs的单细胞悬液（1x107）。将小鼠静脉注射3×106在第7天从HSC-eBMC + iTEC + IL-7 + IL-7的共培养物中收获的iLs。14 d后采集小鼠脾脏、外周血、小肠淋巴结、胸腺和骨髓，用流式细胞术鉴定和分析CD45.1 iL。对于组织学分析，在注射iL后第31天收获肝，肺，肾和小肠。

3.小鼠白血病模型和iLs的过继转移

为了分析iLs的抗肿瘤作用，在第7天从HSC-eBMC + iTEC + IL-7 + IL-7的共培养物中收获iLs。通过与亲和素偶联的抗TCRγδ mAb GL3（BioLegend）和生物素偶联免疫珠（Dynal Inc.）孵育，iLs的γδT细胞被耗尽。使用FITC偶联抗TCRγδ mAb UC7（BioLegend）评估耗尽细胞制剂中残留γδT细胞的存在。C57BL/6小鼠注射1×106EL-4 （CD45.2 H-2+b） 白血病细胞，然后使用iLs或γδT细胞耗尽的iLs（3×106)注射后第50天收获肝、肺、肾和脾脏，分析是否存在白血病细胞以及自身免疫和肿瘤发生的证据。监测其他小鼠组的存活长达10周。

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结果

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