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Primary tumor-derived exosomes f

Primary tumor-derived exosomes f

作者: 一个没有感情的文献阅读机 | 来源:发表于2020-08-23 15:44 被阅读0次

    本文选自oncogene,老文章了,但是方法挺特别的,一起看看吧。

    摘要:肝细胞癌(HCC)是一种致命疾病,患有HCC的患者经常死于转移。肝癌转移的机制尚未完全了解。在本研究中,体外和体内数据显示,HCC细胞以旁环/内分泌方式促进癌细胞增殖和肺转移瘤的形成。我们发现,源自HCC的外泌体介导了这种现象,并观察到在这些恶性外泌体的存在下细胞粘附增强。我们进一步确定了活性氧(ROS)调节粘附分子。有趣的是,附着的HCC细胞释放了同时包含SMAD家族成员3(SMAD3)蛋白和mRNA的外泌体,这些外泌体被递送至分离的HCC细胞并促进其粘附。这些外泌体在受体HCC细胞中诱导了增强的SMAD3信号传导,并增强了其粘附能力。此外,我们发现在肝癌患者外周血中存在SMAD3丰富的外泌体,其水平与疾病阶段和原发性肿瘤的SMAD3表达相关。我们的研究表明原发性肝癌支持转移形成的可能机制,并揭示了SMAD3在外来体介导的原发性和循环HCC细胞之间的串扰中的作用。

    首先作者将裸鼠皮下种瘤,然后在用尾静脉注射相同种瘤的方式造转移瘤模型,发现肿瘤的那批老鼠肺转移明显增多,如果在造转移模型前把皮下瘤切除后,仍会有肺转移形成,但是直接造转移模型的却没有发现转移,作者一度认识是内皮通透引起的这个问题,紧接着进行了血管渗透实验,但是无论是皮下种没种瘤,血管的通透性没有改变。作者认为原发性肿瘤可能通过增强CTC的存活,增殖或粘附而直接影响CTC的生物学,而这些对于成功转移的形成都是至关重要的。在体外模型中,我们发现与新鲜培养基相比,肿瘤细胞条件培养基在更大程度上增强了肿瘤的生存力和粘附性。

    紧接着作者上来就认为外泌体在这个方面发挥作用,然后就研究起了肿瘤来源的外泌体。将肿瘤与外泌体共培养观察肿瘤的情况,发现外泌体有促进肿瘤粘附的作用。

    既然外泌体在这里起到作用,那么作者又看看是不是外泌体被CTC社区了,这个顺序是不是有些乱了。不应该是先摄取,然后促进了上面的表型吗,这做的真是。

    并且神奇的是作者将肿瘤种到皮下后,在用血检测外泌体中的荧光蛋白,这是什么套路。然后作者将肝癌细胞与对应带光的肿瘤外泌体孵育,发现外泌体被摄取,并且将肿瘤和外泌体共同注射到鼠体内建立转移模型发现2h就存在带光的肝癌细胞在肺内定植。如图E所示,作者用了不同的荧光蛋白,共同处理小鼠,然后取学找肿瘤的光,发现这个光重合了,所以说明肿瘤来源的外泌体可以被CTC细胞摄取。

    既然从上面的实验已经验证了外泌体可以被肿瘤摄取并且促进肿瘤粘附,那么这个过程是什么介导的呢?神来之笔,找到ROS,也是结合文献,ROS诱导剂二酰胺显着增加了细胞粘附,这可以被ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)抑制,呈剂量依赖性,低氧显着上调了Huh-7细胞的ROS水平和细胞粘附能力。外泌体显著提高了肿瘤的ROS水平,并可以被NAC抑制。说明外泌体促进ROS,从而发挥CTC粘附的作用。

    肿瘤生长因子(TGF)-β/ SMAD信号通过NADPH氧化酶诱导ROS,作者在自己的文章中也进行了验证,这些作用可以被SMAD3抑制剂SIS3阻断。同时TGF-b可以增强肿瘤的粘附性,并且外泌体也可以发挥这样的作用,此外,PTDEs处理导致受体Huh-7细胞中SMAD3 mRNA水平的增加,即使在没有内源性SMAD3 mRNA的SMAD3-/-细胞中也是如此,通过用环己酰亚胺阻断受体细胞中的mRNA翻译,我们观察到了PTDE降低但未消除的作用,从而增加了靶细胞中SMAD3蛋白的水平,表明SMAD3 mRNA和蛋白都可以直接递送通过PTDE,在PTDEs中可以检测到SMAD3 mRNA和蛋白。为了验证,作者在肿瘤细胞内给SMAD3加了个FLAG,然后在受体细胞也检测到了存在flad的SMAD3的mRNA和蛋白。

    机制总算讲完了,再不讲完,我要完了,然后就是临床验证了。

    总结一下,除了一开始他们做外泌体动物的那部分吸引我以外,文章在后面做的内容真是处处有惊喜,赶紧吃个瓜冷静一下,文章比较散,比较乱,个人存在比较严重的问题,在图2中作者用表荧光的肿瘤种瘤后在鼠血外泌体中找荧光蛋白本身就存在问题,这种方法可取吗?为什么不标外泌体的MARKER?还是怕标了没作用啊。这种先做功能在看摄取的顺序本身就不符合常理,并且对这个研究的结果我也是存在疑问的,同样的肿瘤,都是在一起生长的,本身来说肿瘤的外泌体是可以水平传递的,为什么这里作者还能做出差异来,这个难倒你不觉得本身就不正常吗?中间机制找到tgf-b/smad3这种老掉牙的套路,并且这个通路在细胞水平的作用相当广泛,为什么作者就抓住了粘附性上了呢?只能说明一点,这篇文章在做的时候就已经找到了头和尾,作者只是找了中间的东西把文章串了起来而已,好了,以后还是少看低分文章为好,欢迎大家批评、指正。

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