细菌接合（Bacterial conjugation）是多数细菌实现 DNA 水平传播的一种自然机制，通过细胞间的直接接触，DNA 可以从一个细菌水平传播到另一个细菌。
细菌接合的方式一共有3种：
1. Plate Mating Conjugation Approach
- 将供体和受体分别在 LB 琼脂平板和选择平板（抗性）上划线；
- 将平板在 37 C 培养过夜；
- 培养后，确保选择平板（抗性）上没有生长；
- 从 LB 平板上用无菌环从受体平板上挑取一个菌落，在 LB 琼脂平板上划一道条纹，然后从供体平板上挑取一个菌落，在刚刚划过受体平板的地方划一道条纹。在一个平板上可进行多个受体-供体杂交；
- 将平板在 37 C 温度下培养过夜；
- 翌日在交叉点处，挑取相当于三至四个菌落的细菌细胞，并在含有适当选择剂的选择板上划线（见注 2）；
- 将选择琼脂平板在 37 C 下培养 48 小时，观察生长情况；
- 如果在选择板上看到任何生长，则挑出代表性菌落，将其重新接种到选择板上，并在 37 C 温 度下培养过夜；
- 应评估这些平板上生长的菌落，以确认转基因的身份，并准备在 80 C 下冷冻存档。
2. Broth Mating Conjugation Approach
- 将供体和受体分离物分别接种于 2 mL LB 肉汤中，制备菌株；
- 在 37 C 温度下培养过夜，每分钟振荡 180 转；
- 在每个交配实验中，将 100 μL 供体培养物和 100 μL 受体培养物（1:1 比例）混合在 1.5 mL 试管中；
- 将混合培养物短暂涡旋几秒钟；
- 在 37 C 温度下培养 4 小时；
- 将 100 μL 细胞悬浮液涂抹在适当的选择琼脂平板上（见注 2）；
- 将选择板在 37 C 下培养 48 小时；
-
如果在选择板上看到任何生长，挑出有代表性的菌落，将其重新接种到选择板上，37 C 培养过夜。
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3. Filter Mating Approaches
- 按上述方法制备供体细胞和受体细胞的过夜肉汤培养物；
- 在每次交配实验中，将供体培养物和受体培养物各 100 μL 混合（比例为 1:1），然后加入 800 μL 新鲜的 LB 肉汤。
- 使用涡旋混合器混合细胞悬浮液数秒，然后将悬浮液吸取到注射器中，并将培养液通过过滤器;
- 用灭菌镊子无菌取出过滤器，将过滤器放在羊血琼脂平板上，在37 C 培养过夜；
- 翌日，用无菌接种环挑取过滤器附近的细菌，并悬浮于 1 mL LB 肉汤中；
- 将混合物涡旋，然后将 100 μL 细胞悬浮液涂抹在适当的选择琼脂平板上，并按照肉汤交配实验的说明进行选择。
文献案例
Filter-mating conjugation protocol
质粒通过电转导入供体菌；
供体菌和受体菌分别培养至晚期阶段，然后用1mL 10M MgSO4 洗涤；
将受体菌和供体菌按照1：1混合于3-5mL 10M MgSO4 溶液，终浓度OD600=0.03；
用0.45uM滤膜过滤混合菌，此时菌在滤膜上层；
将滤膜置于 LB 琼脂平板表面进行培养（含菌面紧贴平板）在 30°C培养 ；
将滤膜转移到10M MgSO4 溶液并重悬细胞；
将适当稀释后的培养液涂布在适当抗性的平板上；
细菌细胞可携带多个质粒。要在同一细菌细胞中保留多个质粒，这些质粒不能来自相同的不相容组，因为不相容组编码相同的复制或分割系统，这种现象被称为质粒不相容[5]。
Novick RP (1987) Plasmid incompatibility. Microbiol Rev 51:381–395
To integrate the eGFP gene into the chromosome of Serratia strains, the transposon plasmid pBAM2-GFP24 was individually transformed into a donor strain E. coli S17–1λpir. The freshly cultured pBAM2-GFP-harbouring donor strain and recipient Serratia strain cells were separately washed and resuspended in 10 mM MgSO4 solution (OD600 of 0.1 for each strain), mixed (1:1) and co-cultured on LB agar plates at 37 °C for 5 h for conjugation mating.
——(Gao et al. 2021)
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- 沙门菌接合质粒转移方案：平板法、肉汤法和过滤器交配法
- Khajanchi, B.K., Kaldhone, P.R., and Foley, S.L. (2019) Protocols of Conjugative Plasmid Transfer in Salmonella: Plate, Broth, and Filter Mating Approaches. Methods Mol Biol 2016:129-139.
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