美文网首页
文献阅读(4):The natural product chlo

文献阅读(4):The natural product chlo

作者: scdzzdw | 来源:发表于2023-06-11 17:28 被阅读0次
  • 发表时间:2023/5/10
  • 发表期刊:Cell Host & Microbe


    Graphical Abstract

要点

  • Chlorotonil A (ChA)对艰难拟梭菌(Clostridioides difficile)有抑制活性
  • ChA 在小鼠模型中预防复发性艰难梭菌感染
  • 不同于万古霉素,ChA处理后仍可保留对艰难梭菌的定植抗性
  • ChA 保留在艰难梭菌孢子中,防止营养细胞生长

艰难梭菌背景:

引用:

https://www.chinagut.cn/articles/ss/311af3dd52bd460a9db160c54a766b80?kf=weekly
https://www.mayoclinic.org/zh-hans/diseases-conditions/c-difficile/symptoms-causes/syc-20351691
概括:

  • 艰难梭菌(Clostridioides difficile)是一种可形成孢子的厌氧性梭菌属细菌。
  • 艰难梭菌以休眠状态(Germination)存在于任何环境中。
  • 艰难梭菌可在小肠中接触到初级胆汁酸后开始繁殖 (Vegetative Cells);当艰难拟梭菌到达大肠(结肠)时,会释放破坏组织的毒素 ( TcdA, Tcd, Cdt)。
  • 可形成具有高度传染性和耐受力的孢子(Spore),并通过粪口途径传播。
  • 抗生物使用导致肠道菌群变化,改变对艰难梭菌的定植抵制,使得艰难梭菌滋生,是艰难梭菌感染(CDI)的主要原因之一。
  • CDI 通常采用抗生素治疗,然而多达 20% 的 CDI 患者会再次患病 (rCDI)。

研究意义:

找到一种抗生物,靶向杀死艰难梭菌,且对肠道菌群较小影响,可以保留对艰难梭菌的定植抵制,减少rCDI

研究基础:

  • Chlorotonil A (ChA),一种萜类化合物,报道对革兰氏阳性菌有抑制活性
  • ChB1-Epo2是ChA的一种衍生物,较ChA有更强的水溶性,体内活性
    因此作者推测ChA是对艰难梭菌有窄谱活性

结果:

Chlorotonils对不同Clostridioides difficile菌株有抗菌活性

Figure 1
  • 测试ChA和ChB1-Epo2对八株Clostridioides difficile(四株对特定抗生素有抗性)的抑制效果
  • ChA和ChB1-Epo2对Clostridioides difficile的抑菌效果和常用的抗生物类似
  • 根据杀菌抗生素的经典定义,即 MIC 与 MBC 的比值 < 4,将这两种 chlorotonils 归类为杀菌剂。

ChB1-Epo2 在亚致死浓度下强制代谢重编程和扰乱金属稳态

为了进一步解决亚致死浓度下的生理和生化变化,测定了艰难梭菌菌株 630 的转录对ChB1-Epo2处理的反应。

  • 艰难梭菌生长至指数中期,并用 4.7 ng/mL ChB1-Epo2 处理 30 分钟(亚致死浓度,致死浓度为0.8 ug/mL, 170x?),会导致显着的生长延迟。 DMSO 处理的细胞用作对照(ChA、ChB1-Epo2、 fidaxomicin、metronidazole溶解在DMSO中,vancomycin溶解于水中)。
  • 转录组分析,大量上调基因属于能量产生和转换以及细胞壁生物发生的类别。
  • 病原体对 ChB1-Epo2 的反应主要表现为能量、AA 和碳水化合物代谢的剧烈重编程,大分子和多胺合成的减少,以及应激反应相关基因转录物丰度的增加。
  • 蛋白质组分析90分钟亚致死浓度处理的病菌。在 32 种高丰度和 ON 蛋白中,预计有 11 种会在其保守的半胱氨酸上结合瞬态金属或铁硫簇。
  • 电感耦合等离子体质谱 (ICP-MS) 分析法分析了经 ChB1-Epo2 处理的细胞和未经处理的细胞的金属含量。 ICP-MS 结果表明二价阳离子铜、锌和镉显着增加。


    Figure 2

ChA成功地对抗已建立的 CDI 并防止复发感染

基于克林霉素诱导的微生物群破坏,构建小鼠感染模型

Figure 3
  • 老鼠建模(Figure 3A), 40 mg/kg ChA, 40 mg/kg ChB1-Epo2, or 20 mg/kg vancomycin处理两天。第 2 天后停止抗生素治疗,以监测抗菌作用的持久性,并出现复发性感染的可能性。
  • 感染后 24 小时(第 1 天),小鼠体重严重下降(Figure 3B),表明该病发病迅速。
  • 在第二次给药后的几天内,两组中大多数接受万古霉素和 ChA 治疗的小鼠开始恢复至 66.6% 的最终存活率(6/9 小鼠)。 但是经 ChB1-Epo2 处理的小鼠开始死于感染,最后生存率为22.2%(2/9 小鼠),与载体处理的对照组相同。
  • 万古霉素处理老鼠,体重先增加后降低,可能存在复发感染。ChA 治疗的小鼠体重稳定增加,无复发感染。
  • 在第五天时, 万古霉素治疗老鼠体内Clostridioides difficile的数量显著高于ChA治疗的老鼠。lipocalin-2(典型的肠道炎症的标志物)和产生的毒素的浓度也显著高于ChA治疗的老鼠。
  • 持续检测粪便样本中ChA和万古霉素浓度(Figure 3G)。万古霉素在第三天后不能检测出,而ChA在第五天仍可检测出。证明ChA在体内持续时间更久。
  • 为了测试持续的 ChA 水平是否足以调节体内 CDI 的发展,用克林霉素 (10 mg/kg) 和 ChA (40 mg/kg) 或豆油(作为对照)预处理 SPF 小鼠,然后进行CDI测试。 与对照组相比,ChA 预处理导致疾病发作显着减慢且严重程度较轻,其特征是体重减轻减少和存活率更高。
  • 用艰难梭菌感染无菌 (GF) 小鼠,然后用艰难梭菌感染 抗生素治疗。 无论接受何种治疗,我们都观察到严重的体重减轻(Figure 3I),导致注射后第 2 天的死亡率为 100% (7/7)。 因此,无论是 ChA 还是万古霉素都无法成功预防 GF 小鼠的 CDI,这表明恢复中的微生物群在成功治疗 CDI 中具有生理相关的贡献。

这些结果表明,持续使用 ChA 能够长时间拮抗艰难梭菌,从而促进清除。

在小鼠中,与 ChB-Epo2 和万古霉素相比,ChA 诱导明显的微生物群变化

Figure 4
  • 在治疗第三天,ChB-Epo2 和万古霉素处理的老鼠菌群有很大差别(Figure 4A)
  • 在治疗第三天,万古霉素处理后alpha-diversity更低,对菌群影响更大 (Figure 4B)。
  • 为探究ChA对菌群的单独影响,不对老鼠进行抗生物预处理及感染。用两种浓度(40 和 20 mg/kg)的单次口服剂量的 ChA 或 ChB1-Epo2 治疗小鼠(Figure 4D)。 在不同时间点(第 0、1、3、5 和 7 天)从同一只小鼠纵向收集粪便样本
  • ChA 和 ChB1-Epo2 暂时降低了观察到的物种丰富度和香农多样性指数。

与 ChB1-Epo2 或万古霉素相比,ChA 对微生物群产生明显且不太严重的变化

ChA对仔猪微生物群的影响很小

Figure 5
  • 与啮齿动物相比,猪模型在遗传学、生理学和微生物群组成方面与人类具有更多相似性
  • 在第二次抗生素治疗之前(第 0 天)和 6 小时后(第 1 天)以及接下来的 3 天(第 2、3 和 4 天),从每只动物身上采集粪便样本(未使用艰难梭菌感染)。
  • 随着时间的推移,粪便样本的多样性没有显着变化
  • 通过流式细胞术确定粪便中细菌绝对丰度,定量细菌细胞数量在样本、个体和时间点之间存在显着差异,即使在对照组中也是如此(Figure 5C)

Chlorotoxin 治疗维持肠道新陈代谢并保持对抗艰难梭菌的天然 CR

Figure 6
  • 测定比较24小时抗生物处理之后的代谢组 (Figure 6A、B、C)
  • ChA 或 ChB1-Epo2 (40 mg/kg),或克林霉素 (10 mg/kg) 或万古霉素 (20 mg/kg) 作为对照,然后第二天感染艰难梭菌 VPI10463孢子 (Figure 6D)。
  • 克林霉素和万古霉素处理的小鼠在注射后 1 天开始体重急剧下降,表明这两种抗生素都会破坏 CR 并导致对 CDI 的易感性(Figure 6E)。 ChA 和 ChB1-Epo2 治疗均未导致表型疾病。

这些结果表明,与万古霉素和克林霉素不同,ChA 和 ChB1-Epo2 对与艰难梭菌共享营养生态位或产生 CR 相关代谢物的共生细菌表现出较小的有害作用,从而保持 CR 对艰难梭菌的完整性。

ChA 和ChB1-Epo2 (较小程度)抑制艰难梭菌孢子生长到营养细胞中

Chlorotonils 持续存在于 C. difficile 孢子上并防止小鼠的致死性感染

Figure 7

相关文章

网友评论

      本文标题:文献阅读(4):The natural product chlo

      本文链接:https://www.haomeiwen.com/subject/ytoxydtx.html