建立标准曲线:
- 梯度稀释的标准品;
- 空白管,即不加样品;
- 测量值
以梯度稀释浓度为横坐标,以测量值为纵坐标,进行拟合得到公式。
用Ecxel绘制散点图,然后添加趋势线,显示公式和R2,结果如下:
image.png
但是细心的人会发现,趋势线并不过0点,那是因为没有减掉背景“空白管”的缘故。
image.png合格的标准曲线是“测量值”减去“空白管”后,作为标准曲线的纵坐标测量值;(实际样品测定时候,一定要设置空白组,所有测量的值需要减去空白管后,才运用标准曲线公式进行计算),也是绝对OD值。
样品测定
稀释倍数:
对于未知样品的测定,需要预先做几个差异大的稀释,来预判样品含量的哪个稀释在线性范围之内,然后再进行试验测定。也就是确定最佳的稀释倍数。
注意,在最后换算时候,需要加上稀释倍数。
然后依次测定样品的OD值,带入自己制作的标准曲线,就可以计算出相应的样品浓度值。
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