crispr文献学习1

靶向核酸酶是用于高精度介导基因组改变的强大工具。来自微生物成簇的规则间隔短回文重复序列 (crIspr) 适应性免疫系统的 rna 引导的 cas9 核酸酶可用于通过简单地在其引导 rna 中指定 20-nt 靶向序列来促进真核细胞中的有效基因组工程。在这里，我们描述了一组通过哺乳动物细胞中的非同源末端连接 (nHeJ) 或同源定向修复 (HDr) 进行 cas9 介导的基因组编辑的工具，以及用于下游功能研究的修饰细胞系的生成。为了最大限度地减少脱靶切割，我们进一步描述了使用 cas9 切口酶突变体和配对向导 rnas 的双切口策略。该协议为选择目标位点、评估切割效率和分析脱靶活性提供了实验得出的指导方针。从靶点设计开始，基因修饰可在短短 1-2 周内完成，修饰的克隆细胞系可在 2-3 周内获得。