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Ki67荧光染色

Ki67荧光染色

作者: 天涯清水 | 来源:发表于2021-02-23 19:17 被阅读0次

    细胞Ki67染色,应该是核定位蛋白,却总是染色到胞质,尝试过很多方法,包括抗体稀释液全部用0.3%TritonX-100,未做封闭,延长4度条件下一抗孵育时间至48h,改用37度水浴孵育一抗....还是没有明显的改善,不知道怎么该处理。
    现附上目前实验的步骤:
    1、细胞用PBS清洗
    2、4%多聚甲醛室温固定10min
    3、PBS清洗5min3次
    4、0.3%TritonX-100室温破膜30min
    5、吸去多余的破膜液,孵一抗4度过夜(一抗是用0.3%TritonX-100稀释,Santa Cruz公司Ki67,1:200)
    6、PBS清洗5min
    3次
    7、0.3%TritonX-100稀释二抗,室温孵育2h
    8、复染DAPI
    9、PBS清洗5min*3次
    10、甘油封片

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