反向互补(Reverse Complement) - 免费在线工具 http://www.detaibio.com/sms2/rev_comp.html
由于测序一次只测n个bp,不完整,所以需要把几次结果拼接起来才能看到完整的序列,但是测序的前50个和后50个是不准确的,我们需要把不准确的序列剔除,才能连接
将R序列反向互补用vector NTI打开模板序列和待拼接序列,比较上一个序列和下一个序列相同的地方,一般上一个序列的尾和下一个序列的头的测序是不准确的,需要剔除。
测序后需要观察突变是否正确,一般做两个,这样观察序列看突变的位点可以更清晰,突变的正确与否更能确定。
方法1:snapgene看图谱,有两个峰(测100条DNA序列,50条突变,50条不突变)的是突变正确的(峰代表荧光强度)
方法2:vector NIT看序列上的碱基和模板是否不同
如何在已知突变的氨基酸的条件下,知道是哪个位置上的碱基突变,将模板导入snapgene,view-sequence下面可以看到
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