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双向电泳相关试剂配制

双向电泳相关试剂配制

作者: 实验小助手 | 来源:发表于2022-10-11 10:29 被阅读0次

    1. Bradford 工作液

    95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考马斯亮兰G250,溶解完后再加磷

    85%磷酸 52ml 酸,最后超纯水定容至500ml。过滤后置于棕色瓶

    考马斯亮兰G250 0.035g 外加油皮纸保存(Bradford不稳定,一周内有效)

    2. 裂解液

    尿素 8M

    硫脲 2M

    CHAPS 4%

    DTT 60 mM

    Tris—base 40 mM(如果有条件可以添加PMSF 0.5mM和5%的Pharmalate)

    3.水化液储液

    尿素 8M

    硫脲 2M

    CHAPS 4%

    Tris—base 40 mM

    4.分离胶buffer (pH8.8) 250ml

    SDS 0.4% 1g

    Tris—HCl 1.5M 45.4275g

    5.浓缩胶buffer (pH6.8) 100ml

    SDS 0.4% 0.4g

    Tris—HCl 0.5M 6.07g

    6.凝胶储存液(30%的丙烯酰胺)250ml

    Acr 29.2% 73g

    Bis 0.8% 2g

    7.电极缓冲液(跑一次要配制2500ml)

    甘氨酸 43.2g 36g

    Tris 9g 或 7.5g

    SDS 3g 2.5g

    超纯水定容至3000ml 超纯水定容至2500ml

    8. 0.5M Tris —HCl pH 6.8储液

    6.1g Tris先用30ml超纯水溶解,再用46ml,3M HCl调pH6.8,再加水定容至100ml

    9. 平衡液储液

    脲(即尿素)36g

    甘油 30% 30ml

    SDS 1% 1g

    0.5M Tris—HCl pH6.8 10ml 超纯水定容至100ml

    10.平衡液A(一根胶条)

    DTT 20mg

    平衡液储液 10ml

    11.平衡液B(一根胶条)

    碘乙酰氨 300mg

    平衡液储液 10ml

    0.05%溴酚兰 15μl (平衡液A、B均需临时配制)

    12.0.5%琼脂糖10ml

    琼脂糖 0.05g

    电极缓冲液 10ml

    溴酚兰 25μl

    补:4、5、6的溶液需过滤后储存于4℃备用。

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