样本制备设计要点
1. 样本制备消化方案？
单细胞样本制备其实不仅仅是酶的选择，它包含很多其它的因素，包括科研目的、组织解离方式。
例如：科研目的的选择：
• 如果做某一组织图谱类研究，小诺不建议您冷冻保存再复苏的方式进行单细胞捕获实验，因为某些脆弱敏感的细胞可能会无法被捕获。
• 但是如果您研究的是样本间的比较，或者之前已经做过基础性研究的实验，那么冻存寄送还是比较适合的。
图1 样本制备消化设计参考来源
图2 样本制备消化方案参考1
2. 组织是抽核还是制备成单细胞悬液？暂时不上机10x Genomics的细胞可以怎么保存？
一般情况下，新鲜的单细胞悬液适合大部分研究方向，但是也有部分组织是需要采用冷冻抽核：
• 在实验样本取样过程中存在单次样本量极少、需要频繁取样、时间紧张等情况，那么冷冻抽核也是一种选择；
• 细胞本身直接过大，已经超过10x Genomics官方平台推荐的细胞直径，需要采用抽核。
当然，制备成新鲜的单细胞悬液后，也可能存在特殊情况需要单独保存。其实细胞保存方法除了传统的梯度冻存冷冻外，这些年来也有一些其他的细胞保存方法开始陆续呈现。例如10x Genomics官网流程方法中的甲醇固定及近期的细胞固定的试剂盒，它们都采用制备后固定的方法进行后续的单细胞实验。
图3 样本制备消化方案参考2
文章案例展示及应用
1. 细胞抽核、固定后可以做哪些研究？
其实无论是细胞抽核或者细胞固定，均是为了满足平台及后续科研目的而产生的方法。一般情况下仅做转录组学研究的话，这些方法基本上可以满足。
（1）细胞冷冻抽核：
参考文献：Identification of epilepsy-associated neuronal subtypes and gene expression underlying epileptogenesis
发表时间：2020年10月7日
发表期刊：Nature Communications
影响因子：12.121
研究思路：
（2）细胞甲醇固定：
参考文献：Mosquito cellular immunity at single-cell resolution
发表时间：2020年8月28日
发表期刊：Science
影响因子：41.845
研究思路：
（3）细胞vivoPHIX (RNAssist Ltd, Cambridge, UK)试剂盒固定：
参考文献：Gene regulatory networks controlling vertebrate retinal regeneration
发表时间：2020年10月1日
发表期刊：Science
影响因子：41.845
研究思路：
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