基因或蛋白的激活或抑制,首先需要明确激活或抑制的实施者是谁?机制是什么?相应的检测方法也会有所不同。
如HMGCR是胆固醇合成的限速酶,他汀类药物通过和HMGCR结合而抑制其活性,从而降低胆固醇的合成。那么要检测他汀类药物对HMGCR的抑制,应该检测HMGCR的酶活性。注意酶活性不等于蛋白量,此处应该理解为单位时间内生成一定量产物或消耗一定量底物所需的酶量,所以WB等方法不适合。事实上,他汀类药物抑制HMGCR后,由于胆固醇合成减少,内源性反馈信号通路,其蛋白量和mRNA会显著增加。
1,蛋白修饰激活
磷酸化,去磷酸化,乙酰化,去乙酰化等
如AMPK通过磷酸化激活PGC-1α,
检测指标:磷酸化的PGC-1α
2,转录激活,
Nrf2激活抗氧化酶;检测指标:抗氧化酶的mRNA水平
如果检测抗氧化酶的蛋白水平,能否说明Nrf2激活抗氧化水平?答案是不能。有些基因虽然转录没有增加,但是蛋白半衰期会变化,相应蛋白水平也会变化,如泛素化。靶基因mRNA增加是转录激活最直接结果,也是唯一标准。
3,配体激活受体,
3.1 核受体
如雌激素受体;检测指标:细胞核内受体水平,靶基因的mRNA水平
3.2 膜受体
如胰岛素受体;检测指标:靶蛋白的修饰水平
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