【现学现卖】实时荧光定量PCR——qPCR（2）

​昨天写了篇关于qPCR的推送【现学现卖】实时荧光定量PCR——qPCR，主要是简单介绍以及qPCR的相对定量实验，今天再说说qPCR绝对定量。

1 qPCR相对定量

相对定量是为了测定目的基因在样本中的含量的相对（内参）比例。

昨天文章中重点介绍ΔΔCt法（Ct值比较法），用这个方法的话，在相对定量实验中标准曲线不是必须做的。有人有做标准曲线的习惯，用ΔΔCt法的时候也会做标曲，计算扩增效率之后类的（还可用log2R法），是很严谨的操作，棒棒哒！

相对定量实验的另一种方法就是标准曲线法，可以使用绝对标准品或者相对标准品，操作比Ct法麻烦许多。那么什么时候更加适合用Ct值比较，什么时候用标准曲线呢？

我在赛默飞网站上找到的关于qPCR的介绍中说，他们建议根据斜率选择：

关于这个选择，我觉得是有一定道理的，因为Ct值比较的方法作图有放大效应。各个组或者不同时间点之间的差异大的时候，结果会显得更大，图不好看且不如曲线法反应的真实，哈哈，不知道各位怎么看？

2 qPCR绝对定量

绝对定量是测定目的基因在样品中的分子数目，即拷贝数。

前面相对定量实验，如果偷个懒，还可以不做标曲（其实做了挺好的，更加严谨。）

但是绝对定量的标曲是一定做的，首先构建标准品，然后梯度稀释构建标准曲线。由于用的是已知拷贝数的绝对标准品，实验组Ct结果就可以和拷贝数相对应啦。

更多介绍可以参考网站：

https://www.thermofisher.com/it/en/home/life-science/pcr/real-time-pcr/real-time-pcr-learning-center/real-time-pcr-basics/absolute-vs-relative-quantification-real-time-pcr.html