高效液相色谱法分离蛋白质

高效液相色谱法蛋白质混合物分离

固定相材料和硬件可利用率的改善，大大提高了液相色谱系统在蛋白质纯化中的性能表现。尽管完整蛋白质的高效液相色谱法（HPLC）还不是蛋白质组学分析中最常用的技术，但它非常适用于在初始阶段分离蛋白质混合物。有多种色谱分离法可供选择，包括反相色谱法、阴阳离子交换法、尺寸排除法和亲和色谱法。后者作为一种从复杂混合物中提取蛋白质子集的方法，应用广泛。

在将蛋白质混合物分离这个步骤中，高效液相色谱法与制备型等电聚焦电泳法（IEF）一样有用。高效液相色谱的优点是分离方式多种多样。串联高效液相色谱分离可以结合两种不同类型的色谱法。例如，先进行强阳离子交换，然后反相离子交换，应用到的是两种完全不同的分离模式。在后面文章中会介绍到的肽的高效液相色谱分析，其中离子交换可以耦合串联到反相色谱，以实现高效的串联液相色谱分离。

色谱法分离蛋白质

使用高效液相色谱HPLC法进行蛋白质分离时，首先需要将样品中的蛋白质分解成肽的混合物，在分析之前再进行肽的分离。这种方法最常见的应用是将完整的细胞或组织提取物分解成肽，然后对混合物进行蛋白质谱分析。这种分析使用高效液相色谱法，在一次运行中能够获得数百或数千个肽的质谱数据，其基本原理是将非常不均匀的蛋白质混合物转换为更为均匀的肽混合物，从而使分析更容易进行。一维凝胶电泳（1D-SDS-PAGE）和二维凝胶电泳（2D-SDS-PAGE）在肽的分离中并不实用，尽管制备型等电聚焦电泳可以在肽混合物上进行，但由于目前对制备型等电聚焦电泳作为多肽分离方法对于分离肽混合物的用途可能比较有限。

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北京百泰派克生物科技采用高分辨率质谱平台技术，包括Thermo Fisher的Q Exactive质谱仪，LTQ Orbitrap Velos质谱仪，以及AB SCIEX的6500 Q TRAP质谱仪，结合 Nano-LC高通量液相色谱技术，能够对SDS-PAGE蛋白条带、2D蛋白胶点等样品中的蛋白质进行高效精准鉴定。胶条、胶点蛋白质谱鉴定服务可保证100%的鉴定率。