在大肠杆菌中可以使用IPTG进行基因的可诱导表达,而哺乳动物细胞中则一般使用四环素可诱导表达系统。
一套四环素可诱导表达系统一般包括三部分:诱导剂(例如四环素Dox),反式作用因子(例如tTA, rtTA等)和Tet响应元件(TRE)。其中诱导剂可以通过和反式作用因子结合,调控反式作用因子的构象,从而达到调节反式作用因子与TRE的结合。根据诱导剂处理带来的基因表达的开启或者关闭情况,可以将其分为Tet-off系统和Tet-On系统。
四环素可诱导表达系统Tet-Off系统
tTA与TRE启动子结合不需要Dox,即可启动转录;但加入Dox后,形成Dox-tTA复合物,构象改变而不与TRE启动子结合,阻碍目的基因表达。
Tet-On系统
rtTA这是在tTA的基础上突变而来,其带来的效果正好与tTA相反。无Dox情况下,rtTA不能与TRE启动子结合,基因表达被抑制;加入Dox后,形成Dox-rtTA复合物则能与TRE结合,从而启动目的基因表达。
Tet系统的选择原则
如果你感兴趣的基因是活跃的,只是偶尔关闭,使用Tet-On系统,例如针对某些癌基因的表达。
如果你感兴趣的基因大部分是不活跃的,只是偶尔打开,Tet-Off系统,例如针对某些抑癌基因的过表达。
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