大家好，本次阅读的文献是近期发表在《Journal of Experimental Botany》上的《Pollen-specific SKU5-Similar 13 enhances the growth of pollen tubes in the transmitting tract in Arabidopsis》的一文，通讯作者或是山东农业大学的高新起教授，本文一作是我同级的同学，哎不说了，继续加油呗。
SKU5-Similar protein (SKS)是一组包含19个成员的多铜氧化酶家族，之前的研究过程中发现SKU5定位于质膜和细胞壁对根系发育非常重要。
思路经典反向遗传学：找SKS家族对于生殖作用的基因。
1.通过qRT-PCR以及pSKS13-GUS表达模式确定SKS13的确在花粉以及花粉管中高且特异表达。
2.为了研究基因功能，获得两个T-DNA插入突变体，雄配子传递率下降，发现作用于雄方。
3.通过检查花粉发育，花粉萌发，但是花粉管长度显著小于野生型。有趣的是花粉管体外爆炸的比例也高于野生型，花粉管爆炸通常与细胞壁组分相关，通过染果胶的（PI） 和纤维素（S4B）发现突变体的细胞壁组分异常。在体内实验中，也发现sks5花粉管的生长长度显著低于野生型。
4.SKS13蛋白序列包含一个信号肽和三个铜氧化酶结构。构建表达模式proSKS13::SP-GFP-SKS13和proSKS13::SKS13-GFP，第一种形式不能补回，第二种形式能回补sks13的表型。通过与各种膜（FM4-64）以及壁 （S4B 和 PI）标记的信号共定位发现，SKS13主要定位壁和胞质。
5.找下游，RNA-seq发现信号富集在JA信号通路上。 qRT-PCR发现很多JA合成酶均下调。使用JA合成酶抑制剂（DIECA）出现类似花粉管变慢的表型。暗示着 SKS 正调控 JA的生物合成影响育性。
6.在之前一个包含 WD40 的蛋白 JGB ，也被报道通过抑制JA的生物合成来影响花粉萌发和花粉管生长。构建 jgb sks13 双突发现双突的表型要比单突严重很多，暗示着 JGB 和 SKS13 通过影响不同的信号通路来影响表型。
7. SKS14 单突没表型，与SKS13亲缘关系更近，sks13 sks14 双突表型更加严重暗示着两者冗余性的调控花粉管生长。
问题：
1.如果是通过影响JA，可以直接检测花粉和花粉管内JA含量吗？有技术或者探针吗？
2.通过构建表达模式发现，SKS可能并不是典型的GPI-AP蛋白，那么信号肽或者铜氧化酶的结构域是否重要？
3.分泌活性是否重要，似乎定位于细胞壁的SKS13更加重要。
4.花粉管生长慢和爆炸表型之间的联系。
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