01 刺激剂量
自体CD19 CAR-T细胞疗法是一种新型的癌症治疗方法，已经被批准用于治疗一些血液肿瘤。然而，CAR-T细胞治疗的应用受到了一些限制，如CAR-T细胞功能的不足和不一致性等问题。这些问题直接影响了CAR-T细胞的治疗效果和安全性。
研究人员认为，控制CAR-T细胞的功能和表现可能取决于血液中T细胞样本和CAR-T细胞之间的相互作用。为了探究这个问题，研究人员使用了aAPC，这是一种合成的抗原呈递细胞，用于模拟T细胞和CAR-T细胞之间的相互作用。使用aAPC可以精确控制抗CD3/抗CD28的刺激剂量，从而影响CAR-T细胞的功能和表现。
研究人员发现，在激活T细胞过程中，控制抗原呈递细胞的刺激剂量是调节CAR-T细胞功能和表现的关键因素。通过使用aAPC可以精确控制抗CD3/抗CD28的密度，并深刻地改变CAR-T细胞的表型和功能，从而产生多样化的CAR-T细胞产品库。这些发现为更好地制造CAR-T细胞和提高其治疗效果和安全性提供了指导。
此外，研究人员还发现，不同供体的T细胞样本可能存在个体差异，对CAR-T细胞功能和表现产生不同的影响。例如，患者来源的T细胞样本可能存在更多的CD8阳性T细胞，高水平的抗CD3/抗CD28可能会导致CAR-T细胞过度刺激和死亡。为了解决这个问题，研究人员提出了一个预测模型，只要输入T细胞血样表型，就可以输出特定患者所需要的CAR-T细胞所需的刺激剂量。
02 细胞外囊泡
肿瘤来源的细胞外囊泡（EV）在肿瘤微环境中发挥了重要作用。EV携带肿瘤表面分子，如肿瘤相关抗原、PD-L1，可以与T细胞结合并改变其表型和功能，从而使肿瘤逃避免疫反应，促进肿瘤进展。EV和CAR-T细胞之间的相互作用可能会影响基于CAR-T细胞的癌症免疫疗法的效果。
研究人员发现，EV与CD19 CAR-T细胞的结合依赖于EV表面抗原。CD19阳性EV与CD19阴性CAR-T细胞的结合具有高亲和力和特异性。在与CD19阳性EV共培养后，CD19阴性CAR-T细胞会被激活并释放出促炎细胞因子，例如γ干扰素和白介素-2。EV也可能通过激活CAR-T细胞导致其功能障碍，最终导致杀伤能力下降。长期培养实验证实了CD19阳性EV对CAR-T细胞杀伤活性的影响，表明在与CD19阳性和CD19阳性PDL-1阳性EV一起培养的CD19阴性CAR-T细胞中，细胞毒活性显著降低。
研究人员还发现，CD19在EV上的存在导致EV特异性附着到CD19阴性CAR-T细胞上，激活CAR-T细胞并释放促炎细胞因子。这种激活有助于慢性刺激，上调基因CTLA-4、LAG3、TIM3和PDCD1LG2，这些基因参与CAR-T细胞的功能成熟和随后的耗竭。因此，CD19阳性EV对CAR-T细胞功能的影响是一个复杂的过程，可能涉及多个因素的相互作用。
这些研究结果提示我们，EV可能是癌症治疗中一个重要的潜在目标。进一步的研究可以帮助我们更好地理解EV如何影响CAR-T细胞的功能，以及如何利用这种相互作用来改进CAR-T细胞的治疗效果。此外，这些研究结果还提示我们，需要对CAR-T细胞进行监测，以确保它们在治疗中的最佳表现。
03 去除LCK蛋白
最近的研究发现，细胞中的嵌合抗原受体（CAR）不一定需要特定蛋白质LCK才能工作。实际上，另一种类似的蛋白质FYN和CAR内的CD28胞内结构域可以帮助CAR发挥作用，而没有LCK的CAR细胞比有LCK的细胞工作得更好。
不同于传统的CAR-T细胞，这些细胞只通过CAR传输信号，而不是通过自己的T细胞受体。这意味着可以使用这种去除LCK的CAR-T细胞（disLCK-CAR-T）来创建同种异体CAR-T细胞，而无需消除T细胞受体。此外，与正常CAR-T细胞相比，这种细胞更类似于活生物体中的记忆细胞，并且具有更少耗尽的表型，从而增加持久性并显著提高功效。
信号网络分析表明，disLCK-CAR-T细胞的变化是由FYN相关的增殖、生存途径的增加以及LCK控制的强激活免疫应答的减少引起的。总体而言，这项研究提供了增强CAR-T技术的机会。
04 敲除Lin28蛋白
Lin28蛋白经常在各种类型的癌症细胞中过度表达，它在癌细胞的自我更新中发挥作用，让癌症细胞能够持续生长和分裂。它还参与了癌症干细胞的生成，癌症干细胞是肿瘤内的一小部分细胞，具有自我更新和分化为肿瘤内各种细胞类型的能力，被认为是肿瘤生长、抗治疗和疾病复发的原因。
在这项研究中，研究人员想了解Lin28如何帮助癌症细胞逃避癌症的免疫系统。他们重点研究了名为IDO1的蛋白质，这种蛋白质会产生一种具有免疫抑制作用的分子——犬尿素，可以帮助癌细胞避开免疫系统的检测，实现免疫逃逸。
研究人员分析了癌症患者的样本，发现Lin28B和IDO1之间存在正相关。他们还利用计算机建模预测特定转录基序（Sox2 /Oct4）作为IDO1的增强子，这意味着它有助于IDO1在癌细胞中更强烈地表达。
为了验证他们的假设，研究人员敲除了癌细胞中的Lin28B。结果发现，这降低了Sox2/Oct4的表达，并下调了IDO1。他们还使用小分子抑制剂C1632阻断Lin28，并观察到这也抑制了IDO1的表达，进而又观察到犬尿氨酸的产生也随之减少。此外，研究人员还发现Lin28轴的抑制会损害癌症细胞中PD-L1的表达。
研究人员测试了调节Lin28对免疫细胞（GPC3-CAR T和NK细胞）体外抗肝癌细胞的细胞毒性的影响，并在癌症小鼠模型中进行了测试。结果发现，阻断Lin28可以增强这些免疫细胞杀死癌症细胞的能力，有助于提高免疫治疗的效果。
总的来说，这项研究的结果表明，抑制Lin28可能是增强免疫系统抗击癌症能力的有效策略。通过阻断Lin28，能够减少癌细胞上IDO1和PD-L1的表达，使得癌症细胞更容易受到免疫攻击，并提高某些免疫细胞杀死癌症细胞的效率。
参考文献：
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3、Wu L, Brzostek J, Vale P D S, et al. CD28-CAR-T cell activation through FYN kinase signaling rather than LCK enhances therapeutic performance[J]. Cell Reports Medicine, 2023.
4、Patra T, Cunningham D M, Meyer K, et al. Targeting Lin28 axis enhances glypican-3-CAR T cell efficacy against hepatic tumor initiating cell population[J]. Molecular Therapy, 2023.
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