流式细胞仪分离物质的原理

博士毕业答辩，治疗一千种不细心阅读和理解文献的病！

用了辣么久的流式细胞仪，分离过辣么多的花粉粒和细胞核，Joerg给我讲过辣么多次原理。我统统都：好复杂！我不理懂！没记住！不知道！为了毕业答辩准备，我把它搞懂了。

流式细胞仪原理：

1. 目标物质在盐缓冲液中形成细线形悬浮液；（图中为chromosome suspension）。
2. 目标物质被高压为单线形，一个接一个的排列与光束成直角通过（图中shealth fliud）。
3. 固态激光束提供最常用的光源，通常激光数量都会大于一，每种激光会激发与目标物质相结合的不同的荧光染料。通常这种通过速度是几千个物质每秒（图中fluorescence detector，light source）。
4. 为了将不同的物质分离为不同的亚型，这种细线流被分为~1nL大小的滴状。
5. 滴状带电的目标物质，在通过电场区时与不含目标物质的主流发生偏离，从而被分离出来（图中deflection plates，黄色为含有目标物质的微滴，灰色为不含目标物质的空微滴）。
6. 由于产生小滴的速度大于物质流动的速度，大多微滴是空的，也只有极少数的微滴中包裹有多于1个的目标物质（图中灰色为不含目标物质的空微滴）。

图片原文Advances in plant chromosome genomics

流式细胞仪原理简图

增加小知识点：流式细胞仪测定在测定绝对DNA含量时会受细胞悬浮液的质量、荧光染料、染色时间和参考基因组等因素的影响（Doležel and Bartos, 2005）。