今天12:30遇到了久闻大名的叶老师,和我之前的认知任然相同:优秀的人是相似的,科研思路之快,让人折服。
本来是找他问问相分离的,结果他几句话,让我醍醐灌顶,我将我的收获总结如下:
1 发生相分离的蛋白有很多种类型:比如:(1)prion-like protein发生相分离的前提就是必须有prion-like domains。(2)而我之前2篇文章中的提到的RNA-blinding protein必须要有多个RNA-bling domains。(3)我所感兴趣的VDR,CYP24A1 是DNA结合蛋白,和前两者无关。
2 要发生相分离的前提:(1)瞬转(体外扩增目标蛋白的编码序列,带荧光标签)转入细胞后,在显微镜下看有没有聚集,或者位置变化。如果有聚集就说明可能参与或者发生相分离,如果是后者顺藤摸瓜,找到相分离分子。那我们的目标分子就是发生相分离的伴侣,我们要知道如果没有目标分子这种相分离可否发生。(2)就是stress(使用过表达或者某种刺激使得目标分子的表达量升高)看具体聚集现象。(3)发生相分离是上游机制,其下游功能基本已经研究完毕。
3实验:第一步寻找序列,找公司构建质粒。或者自己构建:
1 序列 pcr
2 跑胶 纯化
3 鉴定(酶切,分子量)
网友评论