本文选自cancer res，DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-16-1979，老文章了，喜欢的可以自行下载阅读。
书接上文，继续探讨铁死亡与吉西他滨耐药的问题
摘要铁死亡是一种由氧化损伤引起的调节性细胞死亡，促进脂质过氧化，但具体的分子调控机制目前还不清楚。在这里，我们发现热休克70kDa蛋白5（HSPA5）对人胰腺导管腺癌（PDAC）细胞的铁死亡有负调节作用。在机制上，激活转录因子4（ATF4）导致HSPA5的诱导，而HSPA5又与谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）结合，防止GPX4蛋白降解和随后的脂质过氧化。重要的是，HSPA5–GPX4通路介导铁死亡抵抗，限制了吉西他滨的抗癌活性。对HSPA5–GPX4通路的遗传或药理学抑制通过在体外和在PDAC皮下和原位动物模型中消除铁死亡抑制来增强吉西他滨的敏感性。总的来说，这些发现确定了HSPA5在铁死亡中的新作用，并提出了克服吉西他滨耐药性的潜在治疗策略。
既往发现erastin诱导铁死亡在KRAS突变的细胞筛选药物时发现的，可以被铁死亡抑制剂抑制，作者在细胞系水平诱导铁死亡发现HSPA5升高。Erastin在癌细胞铁下垂期间触发热休克反应和内质网应激，作者测了相关的蛋白变化，发现了HSPA5和磷酸化的EIF2AK3升高。作者在诱导凋亡、坏死、自噬、铁死亡过程中发现，只有铁死亡时这个蛋白才升高。一些转录因子，包括阴阳1号（YY1；ref.18）、通用转录因子IIi（GTF2I，也称为TFII-I；参考文献19）、激活转录因子（ATF）-4（20）和ATF6（21）已被报道在响应内质网应激时调节单个细胞系中HSPA5的表达。作者分别敲了看看HSPA5的变化，只有ATF敲了后改变了，所以作者认为ATF调节了HSPA5.
既然找到这个蛋白了，那么看看在铁死亡的功能吧。发现敲了以后，细胞对铁死亡敏感了，敲ATF得到同样的效果，挽救实验补充HSPA5 cDNA会逆转铁死亡敏感性（应该是先敲后瞬时转染）。
然后就探讨一下HSPA5引起铁死亡敏感的因素了。作者也是直接，就看了对GPX4的影响。在正常来说没有处理的细胞诱导铁死亡时GPX4 mRNA没有什么变化，但是蛋白水平和活性上受到明显抑制。这其实坐着没有意义啊，因为erastin本来就是作用在GPX上的，你说你为什么要做这个呢？就是再次说明erastin作用在GPX4上吗？然后看看敲减的细胞水平，mRNA水平没有变化，说明研究蛋白对GPX4转录没有影响，但是蛋白水平改变了，说明敲除HSPA5促进了GPX降解。最后在HSPA5敲除的细胞中瞬时转染GPX4,发现逆转了促铁死亡表型。
这种研究真有意思，诱导铁死亡是会促进HSPA5升高，同时升高的HSPA5会抑制铁死亡，这……这……快扶老夫坐下吃瓜。慢着，这不正是耐药的精髓吗？
以上只说明了HSPA5与GPX4的相关性，那么，他们有没有直接联系呢？这里不得不提到HSPA5的功能，作为分子伴侣，她难道是他的优乐美奶茶……，作者用erastin诱导以后，进行了IP，蛋白蛋白互拉，结果发现时间越长，拉下的HSPA5-GPX4复合物越多。转染外源性Myc标记的HSPA5 cDNA增加了PANC1细胞中GPX4和HSPA5之间的相互作用，这些发现提示U46在调节GPX4与HSPA5结合中起重要作用。EGCG是癌细胞中HSPA5功能的抑制剂，在erastin处理后，EGCG抑制HSPA5和GPX4之间的相互作用，促进GPX4蛋白降解，EGCG对HSPA5的药物抑制增加了GPX4蛋白的降解和随后erastin诱导的PDAC细胞的铁下垂。
erastin的另
作者终于扯上吉西他滨了，然后看看HSPA5-GPX是不是影响吉西他滨的杀瘤作用。作者发现吉西他滨以时间依赖的形式影响肿瘤细胞内的HSPA5和GPX4，并且时间越长浓度越高。敲了HSPA5和GPX4后杀瘤作用增强，同时MDA升高。并且这种作用被铁死亡抑制剂抑制。这里可以看出单用吉西他滨的话，细胞是被凋亡抑制剂抑制的，并没有被铁死亡和坏死抑制剂抑制。说明吉西他滨引起的肿瘤细胞凋亡，但是铁死亡通路确实调节了肿瘤对吉西他滨的敏感性。
最后在动物体内来一波实验验证上述观点。这图H都TM歪了。
本文结束了，实验设计挺好的，这工作量绝对不低，着急毕业的可以在胃癌和其他肿瘤上临摹一篇类似的，2-3分应该不成问题，欢迎批评、指正。
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