大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌 (G-)，生长繁殖快，易培养，易观察。
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1. 原理概述
转化（ Transformation）是将外源DNA分子导入受体细胞（是大肠杆菌捕获质粒DNA的过程），使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。
转化过程包括几个连续的阶段：①吸附，双链DNA分子和细胞表面受体部位进行可逆性结合；②转入，双链DNA分子解链，一条单链进入受体细菌，另一条单链降解；③自稳，外源质粒DNA分子在细胞内复制形成双链；④表达，供体基因随同复制子同时复制，并进行转录翻译，外源质粒上的基因得以表达。
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2. 实验材料、仪器和试剂
⑴ 材料：目的基因与载体的连接产物；大肠杆菌感受态细胞。
⑵ 仪器：无菌工作台，恒温摇床，涂布器，封口膜，计时器，42℃水浴锅，制冰机等。
⑶ 试剂：LB固体和液体培养基，50mg/mL卡那霉素（Kan）。
3. 连接产物的转化（Trans1-T1 Phage Resistant Chemically Competent Cell）
⑴ 取100μLTrans1-T1感受态细胞置于冰上缓慢融化，加入10μL连接产物，轻弹混匀，于冰上放置30min（这个过程是让感受态细胞与DNA分子充分接触，然后吸附到细胞的表面，即吸附DNA的一个过程）；
Note：无菌！动作轻柔！冰浴！
⑵ 42℃水浴热激30s，立即置于冰上冷却2min，该过程不要摇动离心管（摄入DNA）；
Note：无菌！42℃！冰浴！
⑶ 复苏
A. 每管加900μlLB液体培养基到上述感受态中 （不含抗生素），37℃，200rpm振荡培养1h（对感受态细胞进行修复）；
B. 制备LB固体培养基：待灭过菌的LB固体培养基冷却到60℃左右时，加入终浓度为50μg/mL Kan，摇匀，倒入90mm培养皿中，待其完全凝固，备用。
⑷ 选择性筛选
C. 5000rpm离心5min，弃900μL上清液，用余下的100μL培养液悬浮细胞；细胞悬浮直接均匀涂布在上述准备好的LB固体选择平板上；
D. 用封口膜将上述平板封口，并倒置培养于37℃恒温培养箱中，培养12-16h，至单菌落出现。
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