§新毕设｜2提取质粒DNA

提质粒：

1、方法：碱裂解法

https://wk.baidu.com/view/2de4724480eb6294dc886c88?pcf=2原理

2、步骤：

0.1%的抗生素（250mL培养基+250微升抗生素）

37℃恒温摇床10h

富集菌液（超净工作台倒1.5mL离心管，12000rpm离心1min，弃上清；重复一次）

+Buffer P1 250微升（作用：溶解），插牙签振荡至没有菌体

+Buffer P2 250微升（作用：裂解），轻柔摇晃，打开盖子后发现粘稠，有“拉丝”现象（表明是大肠杆菌，不是杂菌）

+Buffer P3 350微升（作用：复性），轻轻摇晃，置于4℃冰箱（取出后有沉淀）

此时装好吸附柱和收集管，用700微升的Buffer BL激活吸附柱（需要离心）

冰箱取出12000rpm离心10min（去蛋白质）后，取上清吸至吸附柱，12000rpm离心1min，弃废液

+加有2倍无水乙醇的Buffer PW 700微升，12000rpm离心1min，弃废液；重复一次（作用：用75%的乙醇清洗）

最大转速（14800rpm）离心2min

用1.5mL离心管代替收集管，干燥吸附柱5min（作用：去乙醇）

+Buffer EB 70微升（注意：垂直于吸附膜上加），静置5min

最大转速（14000rpm）离心1min，弃吸附柱，留离心管

测浓度（3个参数：260/280；260/230；ng/微升）

PCR