fsc代表的是forward scatter,这个参数和细胞的大小成正比,A是area的缩写,H是height的缩写。这是机器在记录信号时所采用的参数(不显示在用户界面,在调试机器的时候可以显示)
每个细胞通过激光的时候,机器都会记录一个波状信号(一个拱形的信号),H就是这个拱的高度(代表的是信号的强度),A就是这个拱的曲线下面积,代表信号强度和细胞大小的关系。其实还应该有一个参数W,是width的缩写,是这个拱的宽度,代表细胞通过激光束所花的时间。
不光是FSC,其他每一个通道都有这三个参数可以记录。可以用其中的任何一个,根据实验要求来作图。机器就会根据设置显示出最终的图形了。
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注意事项:
1、有时候,可以染一种在感兴趣的细胞与其他细胞都有表达的标志物(例如在所有白细胞上都表达的 CD45)。虽然这个步骤不是必须的,但对于分析一些稀少细胞类型时有帮助。
2、染细胞时,建议将细胞分在两个试管中,在其中一个试管中,用荧光标记的抗体染感兴趣的细胞,而另一个试管应用荧光同型抗体做为相应的阴性对照,这样有助于在分析中更精确地区分阳性信号和阴性的荧光背景。
3、在必要时,需要通过设置和调节 FSC 阈值,将大部分的细胞碎片、气泡和激光噪声的干扰(全都属于 FSC-low 的区域)排除在分析区域之外。
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