引言
归口单位：全国生物计量技术委员会
主要起草单位：
中国计量科学研究院
凯杰企业管理（上海）有限公司
参加起草单位：
中国农业科学院
首次发布
1. 范围
本规范适用于基于凝胶电泳原理对核酸片段的长度和浓度进行分析的核酸分析仪的校准，使用的核酸片段的长度范围为（100 ~ 1000）bp，对于超出此片段长度范围的核酸分析仪的校准，可参照本规范执行。
PS：核酸分子含有磷酸基团，本身带有电荷。在电场的作用下，会在以一定的速度向适当的电极移动。磷酸基团的话，带负电荷，向阳极移动。
电场是作用在一定的介质上的，这里一般是用琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、以及脉冲场凝胶。不同类型以及浓度大小不同的凝胶，其分辨能力不同。
本规范不适用于平板电泳仪和遗传分析仪的校准。
2. 引用文件
JJF 1265 - 2010 生物计量术语及定义
3. 术语
3.1 片段长度 fragment length
表示核酸片段的大小，以核苷酸数目（nt）或碱基对数目（bp）为单位。
3.2 碱基对 （bp）base pair
核酸中两条链间的配对碱基。
如腺嘌呤 -胸腺嘧啶（A-T）对、腺嘌呤-尿嘧啶（A - U）对、鸟嘌呤 - 胞嘧啶（G - C）对、鸟嘌呤 - 尿嘧啶（G - U）对等。
碱基对数目是表征DNA或双链RNA的长度。
4. 概述
核酸分析仪是基于凝胶电泳技术原理，将不同大小的双链核酸片段进行分离，在荧光染料存在的条件下，荧光染料嵌入双链核酸中发出荧光，对荧光信号进行检测分析的仪器，可根据个核酸片段的电泳时间和荧光信号值进行定性、定量分析。
PS:一般用溴化乙锭（EB）去染色。
但加入EB会影响DNA迁移率，且EB使用要注意风险，还无法确定对身体是否有严重伤害。
常用指示剂有溴酚蓝和二甲苯青。
分析仪通常由进样器、毛细管/微芯片、荧光检测光学部件、微电路控制部件、计算机及应用软件组成，可用于单个或多个PCR片段、限制性内切酶消化的DNA等片段长度和浓度的分析。
5. 计量特性
5.1 示值误差
片段长度示值误差和片段浓度示值误差
5.2 重复性
片段长度重复性和片段浓度重复性
5.3 片段浓度线性
6. 校准条件
6.1 环境条件
实验室应当满足分析仪安装的要求，不得存在强烈的机械振动和电磁干扰。
校准时实验室温度应当控制在（15~30）℃，相对湿度不大于80%。
确保校准过程中环境温度变化小于 3 ℃。
PS:根据 最新CNAS-CL01-A025 2022 6.3.3的要求，当校准方法对环境条件要求严格的时候，要采取适当有效措施监测和记录环境条件
6.2 校准用标准物质和校准设备
6.2.1 标准物质
应采用国内外有证标准物质，如DNA片段标准物质，片段浓度≥ 40 ng/μL，相对扩展不确定度≤ 5 %（k=2）,片段长度范围（100~1000）bp。
6.2.2 校准用试剂和溶液
按照附录 A 配制校准用试剂和标准溶液。根据被校准仪器型号选择配套的试剂盒。校准用标准物质保存在- 20 ℃，配套试剂盒保存在 4 ℃。
6.2.3 移液器
量程范围（1~10）μL、（10~100）μL，经检定合格。
7. 校准项目和校准方法
校准前将低温保存的标准物质及配套试剂提前拿出冰箱，平衡30 min后按照附录 A 配制及使用标准溶液。打开仪器，预热 10 min。
7.1 示值误差
7.1.1 校准板的准备
参照试剂盒说明书，用移液器将示值误差校准用标准溶液加入到校准板中。
若校准板为 3 × 4 孔的芯片模式，按照表 1 所示准备校准板；
若校准板为 12 联排管模式，按照表 2 所示准备校准板；
其他模式的校准板可参照表 1 和表 2 准备。
空白用一级水代替标准溶液。
来源至国家计量技术规范全文公开系统
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7.1.2 片段长度示值误差
参照仪器说明书，将准备好的校准板置于分析仪内进行测量。记录 10 次片段长度测定值，按式（1）计算片段长度示值误差。
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PS：按照公式提及，平均值保留整数。
7.1.3 片段浓度示值误差
参照仪器说明书，将准备好的校准板置于分析仪内进行测量。记录 10 次片段浓度测定值，按式（2）计算片段浓度示值误差。
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7.2 重复性
参照 7.1.1 的加样方式，重复测量 10 次标准溶液的片段长度和片段浓度，按式（3）分别计算相对实验标准偏差，作为片段长度重复性和片段浓度重复性。
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7.3 浓度线性
7.3.1 校准板的准备
参照试剂盒说明书，用移液器将配制好的0.1 ng/μL、1 ng/μL、4 ng/μL、10 ng/μL、40 ng/μL的DNA片段浓度线性标准溶液加入到校准板中。
每个浓度加样 2 次，按表 1 或表 2 所示排布准备校准板，其他模式的校准板可参照表 1 和表 2 准备，空白用一级水代替标准溶液。
7.3.2 片段浓度线性
参照仪器说明书，将准备好的校准板置于分析仪内进行测量。
每个浓度的线性标准溶液进行 2 次重复测量，取其浓度的算术平均值，根据标准溶液的浓度标准值为横坐标和测得的浓度平均值为纵坐标进行线性回归，按式（4）计算线性相关系数。
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8. 复校时间间隔
建议不超过一年。
9. 附录
附录 A 校准用试剂和溶液配制及使用方法
A.1 纯水：符合GB/T 6682 规定的一级水。
A.2 标准物质：DNA片段标准物质，浓度相对扩展不确定度 ≤ 5 %（k=2）。
A.3 三羟甲基氨基甲烷（Tris - HCl）:分析纯。
PS:白色结晶、毒性低，可致癌，不要直接接触皮肤。
A.4 乙二胺四乙酸（EDTA）：分析纯
PS：白色结晶粉末
A.5 TE缓冲液的配制：
用分度值为0.000 01 g的天平称量 1.576 g的Tris - HCl；
0.292 g的EDTA；
加入至 1 L的三角瓶内，向三角瓶内加入 700 mL一级水，待全部溶解后；
调节pH至8.0，然后用 1 L的量筒定容。
A.6 校准用标准溶液的配制
A.6.1 示值误差和重复性校准用标准溶液：
用TE缓冲液将DNA片段标准物质稀释为 2 ng/μL的标准溶液。
A.6.2 线性校准用标准溶液：
用TE缓冲液将DNA片段标准物质分别稀释为 0.1 ng/μL、1 ng/μL、4 ng/μL、10 ng/μL、40 ng/μL的系列标准溶液。
A.7 标准溶液的使用
溶液上样量按照被校仪器说明书执行。
以12连排管或8联排管模式进样的分析仪，上样量一般为 15 μL。
以12孔芯片模式进样的分析仪，每孔上样量一般为 1 μL。
大家好，我是牵黔浅唱丶
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