文献阅读-ANK6的功能鉴定

本次阅读的文献是2010年发表在《PNAS》上的《ANK6, a mitochondrial ankyrin repeat protein, is required for male-female gamete recognition in Arabidopsis thaliana》的一文，通讯作者是栾升教授，ANK6是一个锚定重复蛋白，这种锚蛋白被认为对蛋白与蛋白的相互作用非常重要。

为了鉴定这样的ANK，利用eFP筛选那些在雌雄双方均有表达的ANK，构建的表达pattern，发现ANK6在花粉，雌方的胚囊中均有表达。那么到底雌雄双方哪一个更加重要。正反交表明雄方传递率100%雌方传递率82%，表明雌方受到微弱影响。

ANK6p-GUS

进行突变体观察，ank6拿不到纯合体，杂合体会出现约为31.6%的败育比例，使用全长序列进行回补能够进行回补。观察蛋白定位发现ANK主要要在线粒体以及核中表达（根）。

突变体育性分析

那么ANK6的互作蛋白是什么?通过酵母双杂的手段鉴定到一个线粒体转录其实因子SIG5，SIG5杂合体也会出现败育的胚珠。为了确定ANK6以及SIG5的相互作用，通过pull-down以及BIFC实验，进一步完善并发现ANK6主要与SIG5的非保守序列结合。

ANK6以及SIG5的相互作用

观察SIG5的表达模式发现SIG6与ANK6的表达模式相似，进一步暗示这两个基因协调发挥功能。

SIG5表达模式

为了鉴定这个败育出现的原因，作者进行观察。利用ank6−/+  HTR10p:HTR10-mRFP 自交的材料发现能够见到未融合的精细胞，暗示配子之间的识别出现问题。

因此本文发现了一条SIG5-ANK介导配子识别的信号通路，但是SIG5的表型没有得到进一步确认。