管家基因：指所有细胞中均要稳定表达的一类基因，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的。如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。管家基因是一类始终保持着低水平的甲基化并且一直处于活性转录状态的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小，而且是在个体各个生长阶段的大多数，或几乎全部组织中持续表达，或变化很小，因此常存在于生物细胞核的常染色质中。它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
内参蛋白：指由管家基因（house keeping gene）编码表达的一类蛋白，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在实验中检测蛋白的表达水平变化时常用它们来做参照物。
这些内参蛋白常应用于 Western Blot 中，Western Blot 不仅能证明样品中是否含有某种蛋白，还能比较不同条件、不同组织和细胞中目的蛋白的相对含量，从而衡量蛋白的表达水平。内参蛋白作为一种参照物，在其中的作用为确定样本使用量的一致性，以及校正实验过程中可能出现的操作误差，从而进一步保证实验结果的准确性。那么对于不同的蛋白，内参蛋白该如何选择呢？
不同的内参蛋白该如何选择？
一、对于内参蛋白的选择首先是考虑分子量。一般情况下，内参蛋白和检测的目的蛋白最好相差在 5kDa 以上。如分子量为 45kDa 的检测蛋白，我们可以选择 Tubulin Beta（54kDa），Lamin B1（66kDa）等，而不选择 ACTa2（42kDa）或者 beta-actin（45kDa）。
二、其次对于不同的组织，应选择不同的内参。如肌动蛋白是一种细胞骨架蛋白，有六种不同的亚型，包括： alpha-skeletal muscle actin、alpha-cardiac muscle actin、alpha-smooth muscle actin、gamma-smooth muscle actin、beta-actin (β-non-muscle) 和 gamma-non-muscle actin。其中常用作 Western Blot 内参的 beta-actin 在肌肉和脂肪组织中分布较少，那么若样本是心肌或脂肪组织来源的，就可以考虑分别用 alpha-cardiac muscle actin (ACTC1) 和 GAPDH 作为内参蛋白。
三、最后，提取蛋白的部位不同，选择的内参蛋白也不同。比如有时胞质、胞核分开提取而不提取总蛋白时，就要选择相应部位表达的内参蛋白。如 PCNA 在细胞核中高效稳定表达，理论上在细胞质不表达，那么对于胞质提取的蛋白，就不能选用 PCNA 作为内参蛋白，而应该选择细胞质中表达的 Tublin Beta、Actin Beta 等作为内参蛋白。
链接：https://www.biomart.cn/specials/cloudclone2017/article/534886
本网站所有注明“来源：丁香园”的文字、图片和音视频资料，版权均属于丁香园所有，非经授权，任何媒体、网站或个人不得转载，授权转载时须注明“来源：丁香园”。
网友评论