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2018-10-14 测序基本知识

2018-10-14 测序基本知识

作者: 生信银河战舰 | 来源:发表于2018-10-14 23:52 被阅读28次

1##一代测序
sanger测序,双脱氧核苷酸ddNTP会结合所有位点,
设置四个反应体系1-4,分别加入引物、DNA聚合酶、四种dNTP、一定比例的ddNTP(带有放射性标记)ddATP遇到了T位点,就结合并终止
准确性高达99.999%
2##二代测序
第二代DNA测序技术(next generation sequencing,NGS )-循环阵列合成测序法。
主要特点高通量

Roche公司的454技术、illumina公司的Solexa/Hiseq技术和ABI公司的SOLID技术标志第二代测序技术诞生
Illumina:Hiseq(Pair End双端)
flowcell: 测序反应的载体/容器,1个flowcell有8个lane
lane: 测序反应的平行泳道,试剂添加、洗脱等过程的发生位置
双端测序: 可能序列比较长有四五百bp,两边各测120-150bp
flowcell构造:一个lane包含两列(swath),每一列有60个tile,每个tile会种下不同的cluster,每个tile在一次循环中会拍照4次(每个碱基一次)
第一步: 构建DNA文库
第二步: 上样 【重点搞清楚lane上有哪两种接头,待测序列含有哪两种接头,这很重要!】
第三步:桥式PCR
第四步:测序

3##三代测序
 第三代测序技术以PacBio公司的SMRT和Oxford Nanopore Technologies 的纳米孔单分子测序技术为标志,不需要经过PCR扩增,超长读长,可达二代测序的100倍以上,实现了对每一条DNA分子的单独测序。错误率比二代要高,达到10-15%。

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网友评论

  • 小洁忘了怎么分身:你竟然木有学会markdown 花花学姐表示不开心
  • 生信银河战舰:虽然很久以前就看过很多测序原理介绍,但是看了豆豆学长花花学姐总结的资料还是总结的很全面很通俗易懂的,收获很大,感谢😄

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