1##一代测序
sanger测序,双脱氧核苷酸ddNTP会结合所有位点,
设置四个反应体系1-4,分别加入引物、DNA聚合酶、四种dNTP、一定比例的ddNTP(带有放射性标记)ddATP遇到了T位点,就结合并终止
准确性高达99.999%
2##二代测序
第二代DNA测序技术(next generation sequencing,NGS )-循环阵列合成测序法。
主要特点高通量
Roche公司的454技术、illumina公司的Solexa/Hiseq技术和ABI公司的SOLID技术标志第二代测序技术诞生
Illumina:Hiseq(Pair End双端)
flowcell: 测序反应的载体/容器,1个flowcell有8个lane
lane: 测序反应的平行泳道,试剂添加、洗脱等过程的发生位置
双端测序: 可能序列比较长有四五百bp,两边各测120-150bp
flowcell构造:一个lane包含两列(swath),每一列有60个tile,每个tile会种下不同的cluster,每个tile在一次循环中会拍照4次(每个碱基一次)
第一步: 构建DNA文库
第二步: 上样 【重点搞清楚lane上有哪两种接头,待测序列含有哪两种接头,这很重要!】
第三步:桥式PCR
第四步:测序
3##三代测序
第三代测序技术以PacBio公司的SMRT和Oxford Nanopore Technologies 的纳米孔单分子测序技术为标志,不需要经过PCR扩增,超长读长,可达二代测序的100倍以上,实现了对每一条DNA分子的单独测序。错误率比二代要高,达到10-15%。
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