基因载体活性检测双荧光素酶实验

1、 实验简介

Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的实验。荧光素底物会在荧光素酶作用下会发光（波长540-600nm），且光强能反应荧光素酶的表达量。荧光素酶的蛋白表达量与启动子活性、mRNA的稳定性及翻译效率相关。从而将待测启动子、UTR等序列与荧光素酶ORF框融合表达，再检测其发光强度，就能判断这些序列对蛋白表达的影响

为了减少实验误差，同时转染一个能稳定表达的肾荧光素酶的质粒作为内参，催化腔肠素氧化产生蓝光（波长460-540nm）；所以叫双荧光素酶报告基因检测。

2.实验流程图

3.服务内容：双荧光素酶报告检测启动子活性服务主要分为以下两种：

a. 启动子活性分析，用于检测待测启动子是否有活性及其活性区域；

b. 启动子与转录因子结合验证，用于研究某转录因子是否调控某基因的待测启动子，以及它们的结合区域

4. 送样要求

a.重组载体：

质粒不少于2ug，或甘油菌约100ul

b.细胞：

活细胞，2个T25瓶，细胞汇合度＞80%（广州市内）；或冻存细胞2管（广州外地区）

备注：载体或细胞可由如期代为构建或购买

 

5. 样本保存和运输要求：

a. 质粒或甘油菌可用冰袋保存运输；

b. 活细胞常温取样；

c. 冻存细胞干冰取样/运输：需要至少在送样前一天通知我方。