NGS-文库的构建

NGS

DNA文库构建

当我们使用二代测序技术对样本进行测序时，主要经过样本核酸提取、文库构建、上机测序、数据分析和结果验证几个步骤。其中，DNA文库构建是二代测序技术的基础，DNA文库构建的本质就是在将待测定样本的大片段基因组DNA片段化为小片段的DNA，之后在小片段DNA分子两端添加测序接头，形成能上机测序有效的文库分子的过程。具体的二代测序小片段DNA文库构建流程包括DNA片段化、末端修复、A尾添加、接头连接和PCR富集五步。（下图是适用于Illumina平台的DNA快速建库流程）

文库构建流程

以下是某公司产品简介，主要为文库构建试剂盒，可大致了解文库构建的整个环节。

建库试剂盒 其中一款试剂盒的时间安排

RNA文库构建

二代测序RNA文库的构建，根据RNA的种类主要分为mRNA文库、lncRNA文库、small RNA文库等。mRNA和lncRNA文库构建流程包括RNA富集、RNA片段化、cDNA第一链及第二链的合成、末端修复、A尾添加及PCR富集。RNA富集是mRNA及lncRNA文库构建前的必要步骤，这是因为rRNA在总RNA中占比超过80%，如不进行rRNA去除操作，mRNA及lncRNA文库的测序数据中绝大部分为rRNA的相关数据，不利于全面深入的分析mRNA及lncRNA的表达差异及序列变化。Small RNA文库与mRNA及lncRNA文库的构建流程是不一样的，主要包括3'接头连接及封闭、5'接头连接、cDNA合成、PCR富集。基于Illumina平台的。

RNA操作流程如图所示：