在同源重组酶的作用下,通过识别目的片段上带有的载体末端同源序列,将目的基因和载体连接起来,再导入宿主细胞中,实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。
SnapGene界面.png
1. 标记目的基因(上游2000bp的5'UTR和下游2000bp的3'UTR)
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2. 5'UTR和3'UTR片段扩增引物设计(产物大小1000-1500bp)
Actions→ PCR → Select PCR product
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3. NEBuilder HiFi DNA Assembly 模拟克隆
Actions→NEBuilder HiFi DNA Assembly→Insert Fragment
Vector:选择线性化方式(限制性内切酶)
Fragment:选择F和R引物
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