一、调控通路：

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在细胞的自我更新过程中，转录因子nanog、sox2和oct4促进Lnc-ROR的表达，之后Lnc-ROR作为miR-145的内源性海绵吸附体，促进转录因子nanog、sox2和oct4的表达。

二、实验流程：

ceRNA实验流程

作者首先使用RNAFISH实验技术检测未分化和分化细胞中的LncROR的表达和分布说明LncROR与细胞分化有关，然后研究LncROR的调控机制。作者用WB实验检测ROR过表达/敲低后的OCT4等蛋白的表达来说明LncROR对蛋白表达的影响，然后通过荧光素酶实验检测miR-145与OCT4等mRNA的关系和miR-145与ROR的关系。Q-pcr检测ROR敲低后的miR-145前体和成熟体的表达说明ROR对miR-145表达的影响，随后对miR-145、LncROR敲低检测OCT4等的表达验证RNA对靶标的影响。此外，作者通过检测OCT4等敲低检测LncROR的表达和CHIP实验来说明OCT4等蛋白促进LncROR表达。

三、核心FIGURE:

Figure1说明的是OCT4、Nanog、SOX2促进LncROR的表达。

Figure1说明的是OCT4、Nanog、SOX2促进LncROR的表达。
A、先用Q-PCR分别检测OCT4和Nanog敲低后的LncROR的表达，然后用CHIP实验检测与OCT4、Nanog、SOX2结合的DNA片段，结果表明OCT4、Nanog、SOX2结合到LncROR启动子上促进LncROR的表达。

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**Figure2 **说明的是LncRNA ROR通过与miRNA的海绵吸附作用，促进OCT4、Nanog、SOX2的表达。

A、分别Q-PCR和WB检测LncROR过表达和敲低后的OCT4、Nanog、SOX2的表达，结果表明LncROR与OCT4、Nanog、SOX2的表达正相关。

B、miRNA与OCT4、Nanog、SOX2以及LncROR结合能力的检测，以miR-16-5b为阴性对照，结果表明几种miRNA与OCT4、Nanog、SOX2、LncROR的结合能力很高。

C、荧光素酶活性检测miRNA与OCT4、Nanog、SOX2、LncROR的关系，结果表明miRNA抑制OCT4、Nanog、SOX2、LncROR的表达活性。

D、荧光素酶活性检测miR-145结合LncROR结合的位点。

E、荧光素酶活性检测LncROR诱导的OCT4等基因的3’-UTR与miR-145的关系，结果表明miR-145抑制蛋白的表达，而LncROR会降低miR-145的抑制作用。

G-H、Q-pcr检测miR-145初始转录本、miR-145前体和成熟miR-145的表达水平，结果表明LncROR影响miR-145的表达。

I、通过miR-145和LncROR的敲低检测OCT4、Nanog、SOX2，结果表明miR-145负调控OCT4、Nanog、SOX2，LncROR正调控OCT4、Nanog、SOX2。

参考文献:Yue Wang, Zhenyu Xu,Junfeng Jiang,et al.Endogenous miRNASponge lincRNA-RoR Regulates Oct4, Nanog, and Sox2

in Human EmbryonicStem Cell Self-Renewal［J］.Developmental Cell，2013， 25, 69–80