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RNA-seq摸索:4.2 rawdata差异分析的一些图

RNA-seq摸索:4.2 rawdata差异分析的一些图

作者: 没有猫但是有猫饼 | 来源:发表于2020-11-24 21:07 被阅读0次

    参考这篇:拿到基因表达矩阵之后的那点事(三)
    DESeq2详细用法 💥这篇要好好看!
    RNA-seq(6):数据可视化——学习笔记
    古歌看

    这步之前已经拿到res!

    1. P值分布图:观察原始p值的分布是重要的,期待去看到在较低的p值处有个峰且P值高于0.1时处于均匀分布

    library(ggplot2)
    ggplot(res, aes(x = pvalue)) +
      geom_histogram(bins = 100)
    

    注意这个时候的res要转为dataframe状态

    p值分布图

    2. RLE plot

    library(EDASeq)
    par(mfrow = c(1, 2))
    plotRLE(counts(dds), outline=FALSE, ylim=c(-4, 4),
            col=as.numeric(colData$group),
            main = 'Raw Counts')
    plotRLE(DESeq2::counts(dds, normalized = TRUE),
            outline=FALSE, ylim=c(-4, 4),
            col = as.numeric(colData$group),
            main = 'Normalized Counts')
    

    3. 差异基因画热图

    #rlog 标准化
    rld <- rlog(dds)
    #读取
    exprMatrix_rlog <- assay(rld)
    
    diff_gene <- subset(res, padj < 0.05 & (log2FoldChange > 1 | log2FoldChange < -1))
    #💥这里因为我的resGeneId列被作为行名,所以这么写
    diff_gene$GeneID <- rownames(diff_gene)
    diff_data <- as.matrix(exprMatrix_rlog[diff_gene$GeneID, ]) 
    # colorRampPalette(c("navy", "white", "firebrick3"))(50)
    hmcol <- rev(colorRampPalette(RColorBrewer::brewer.pal(9, "YlOrRd"))(255))
    ann_colors=list(condition=c(C="#377EB8",Tg="#E41A1C")) #设置颜色
    #这行运行不出来 跳过也可
    colData <- colData%>%tibble::column_to_rownames('Sample')
    
    pheatmap::pheatmap(diff_data, scale="row", color = hmcol,show_rownames = F,fontsize_row=2,annotation_col = colData, annotation_colors=ann_colors,cutree_cols = 2)
    
    

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