选择清洁、干燥、宽阔的场所进行操作。
解开无菌包系带卷放在包布下边。
用拇指和食指先揭左右两角，最后揭开内角，注意手不可触及包布的内面。用无菌（镊）取出一块无菌巾放于治疗盘内，剩余部分按原折痕包起扎好，并注明开包时间。
铺无菌盘：单巾铺盘：双手拇、食指捏住治疗巾两上角外面，轻轻抖开，双折铺于治疗盘上，内面为无菌区，盖的半幅成扇形折到对面无菌盘上，开口边向外，放入无菌物品后，边缘对齐盖好。将开口处向上翻折两次，两侧边缘向下翻一次，以保持无菌。
双巾铺盘：双手捏住无菌巾的左右两上角的外面，轻轻抖开，由远向近铺于治疗盘上，无菌面向上，放入无菌物品。依上法夹取另一块无菌巾，由近侧向对侧覆盖于治疗盘内上，边缘多余部分反折，不应暴露无菌区。
打开无菌容器盖，必须把盖的无菌面（内面）向上，放在稳妥处，夹取所需物品放入无菌盘内后立即盖严。
等等等。
1、所谓的无菌操作，是指接种操作的空间、使用的器皿和工具、操作的衣着和手，不能沾染任何活的微生物，以保证接种材料不沾染杂菌的整个接种操作过程，也是菌种分离、转扩中的重要技术环节之一。
2、无菌操作本身保证样品的真实性，避免对样品的污染；无菌操作同时也包括了对操作者的要求，因此也保护了操作者本身的安全；无菌操作一般都是在特定的生物安全柜进行，这样也利用了生物安全柜的特性，保证操作中形成的气溶胶不会扩散到环境中，因此也是对环境的保护。
3、原则：
在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区。
执行无菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。
夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。
进行无菌操作时，凡未经消毒的手、臂、均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。
无菌物品必须保存在无菌包或灭菌容器内，不可暴露在空气中过久。无菌物与非无菌物应分别放置。无菌包一经打开即不能视为绝对无菌，应尽早使用。凡已取出的无菌物品虽未使用也不可再放回无菌容器内。
无菌包应按消毒日期顺序放置在固定的柜橱内，并保持清洁干燥，与非灭菌包分开放置，并经常检查无菌包或容器是否过期，其中用物是否适量。
无菌盐水及酒精、新洁尔灭棉球罐每周消毒一次，容器内敷料如干棉球、纱布块等，不可装得过满，以免取用时碰在容器外面被污染。
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