iTRAQ/TMT 相对定量技术
利用同位素标记试剂可同时比较2-11个样本中几千个蛋白质的定量差异。
Labelfree 相对定量技术
通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据。
DIA相对定量技术
(Data-Independent Acquisition)技术融合了传统蛋白质组学“鸟枪法”(shotgun)和质谱绝对定量“金标准”选择反应监测/多反应监测(SRM/MRM)技术的优势和特点。另外,DIA技术将质谱整个全扫描范围分为若干个窗口,高速、循环地对每个窗口中所有离子进行选择、碎裂、检测,从而无遗漏、无差异地获得样本中所有离子的全部碎片信息。因此,定量更加准确。
PRM绝对定量技术
(parallel reaction monitoring)是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术,能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。
修饰蛋白质组学
利用蛋白质发生修饰后的质量偏移来实现翻译后修饰位点的鉴定;同时,由于翻译后修饰的蛋白质在样本中含量低且动态范围广,检测前需要对发生修饰的蛋白质或肽段进行富集,然后再进行质谱定性或定量分析。
蛋白溶液鉴定
能够鉴定出尽可能多的肽和蛋白质分子
样本收集和寄送注意
迅速性原则
样本质量是实验中影响实验结果的最关键因素,因此用于研究的样本,在采集、制备、贮存、运输过程中应尽可能地做到迅速,最大限度的缩短从样本采集到实验的时间,减少非实验因素对样品产生影响。
低温原则
所取样本离体后,如有分离步骤立即在4度或冰上等低温下进行,分离好的样品立即置于液氮、干冰或-80℃冰箱中,并保证在实验前始终处于-70℃以下,以及避免蛋白的降解和蛋白的继续变化。
样本无杂质污染或干扰。(植物样本无粉尘泥土或其他干扰,动物组织无血迹残留)
取样部位要一致,包装完好,标记明确(填好送样表单)
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