Bend.3小鼠脑微血管内皮细胞培养要点

细胞用表达多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆转录病毒转染进行转化。

观察到血管性血友病因子的表达及对荧光标记的低密度脂蛋白（LDL）的摄入确认其内皮细胞特性。

bEnd.3 cells细胞可用细胞因子和脂多糖(LPS)诱导淋巴细胞的Peyer's结高内皮细胞受体， 粘膜血管定居因子(MAdCAM-1) 及内皮细胞选择素的表达。

肿瘤坏死因子 a (TNF alpha), 白介素 1 (IL-1)或 LPS的诱导作用是浓度及时间依赖的。

代数较早的bEnd.3细胞未受刺激时在表面表达MAdCAM-1，但过了30代后就不表达了。

细胞粘附分子 1 (ICAM-1)持续表达，并在LPS, IL-1 and TNF a处理后升高。

30代前血管细胞粘附分子 1 (VCAM-1)持续表达，但30代后不表达。

bEnd.3细胞中肿瘤坏死因子a (TNF alpha)可以诱导P-选择素的表达，30代后更强。

Bend.3细胞信息

细胞名称：小鼠脑微血管内皮细胞

细胞简称：Bend.3

细胞别名：bEND.3; b.End3; Bend.3; bEnd3; BEND3; brain-derived Endothelial cells.3

产品货号：TCM-C715

种属来源：小鼠

组织来源：脑

细胞形态：上皮样细胞

生长特性：贴壁生长

培养体系：DMEM-H+10%FBS+1%P/S

配套培养基货号：TCM-G715

传代比例：1:4-1:6，每2-3天换液一次

传代周期：24-32 h

培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃

冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存

推荐海星 HyCyte®一步冻存液（即用型、无血清、无需程序降温），货号：GUCP-201

Bend.3细胞培养要点

bEnd.3细胞最常遇到的问题就是细胞形态变化和难消化

细胞形态问题

Bend.3细胞本身生长较慢，在低密度时会呈现不规则细胞形态，高密度时则呈规则纤维状，所以若在培养过程中发现细胞形态异常，则有可能是细胞密度低，建议细胞铺满密度较高时传代。以下为bEnd.3细胞不同密度培养图片：

细胞消化问题

1. 消化时间：bEnd.3细胞培养时间越长越难消化，培养4天传代，一般消化3-5分钟；培养7天传代，一般消化5-10分钟。具体消化时间以显微镜下观察细胞状态为准。

2. 难消化问题：如遇到消化困难不必担心，可通过分次消化的方式解决，具体操作方法如下（以T25瓶细胞为例）：

(1) 吸出原培养液；

(2) 加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃；

(3) 加入1mL左右胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞；

(4) 放入培养箱消化，消化3-5分钟（根据具体细胞稍作延长或缩短），显微镜下看到细胞开始漂浮，可以加入2mLPBS，晃动培养瓶使细胞悬浮，不要吹打剩下的贴壁细胞；

(5) 吸出培养瓶内的PBS和细胞悬液，转移到无菌离心管中，在离心管中加入3mL含血清的培养基终止消化并吹散细胞，使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液；

(6) 原培养瓶中加入0.5mL胰酶，晃动培养瓶浸润细胞，放入培养箱继续消化，直到细胞块中间全部收缩变圆，晃动培养瓶可脱落；

(7) 用3mL含血清的培养基终止消化，将瓶底的细胞全部吹下，并轻轻吹吸分散细胞呈单颗；

(8) 收集细胞悬液与第一次消化下来的细胞合并到一个离心管；

(9) 离心收集细胞沉淀，1100rpm/min 4分钟，离心完吸出上清丢弃；

(10) 加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞，按需接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养；

(11) 检查培养箱二氧化碳，温度和水盘。

Bend.3细胞培养注意事项

(1) 细胞培养过程中形态多样，低密度时容易出现放射状细胞，看似已经铺满瓶底，其实细胞量较少，需要细胞胞体排列紧密的时候进行传代；

(2) 细胞培养过程中避免频繁换液，可以每隔2-3天换液或者半量换液一次；

(3) 培养过程中会产生10%左右活的单颗漂浮细胞，贴壁细胞密度偏低时，注意收集悬浮细胞，贴壁细胞密度偏高时，可以换液时丢弃；

(4) 接种量对细胞生长有影响，接种量过低细胞会有增殖缓慢，漂浮过多的现象，请注意控制传代比例；

(5) 细胞对温度和pH较敏感，传代或换液前培养基可以常温复温4小时以上；避免使用pH改变（偏酸：颜色偏黄；偏碱：颜色偏紫红）的培养基；

(6) 细胞传代过程中若出现单次消化时间过长，可进行分次消化，切不可将细胞强行吹下来，以避免吹打造成细胞机械损伤。