高通量测序技术的临床应用 应斌武
肿瘤分子诊断的挑战——组织样本局限性，组织活检的问题：1确诊时已确定为晚期，身体虚弱，无法承受活检。2、侵入性的组织活检风险高，痛苦大，不愿意承受风险。3、无法取够基因检测所需的组织样本。4、术后复发，很难再次取得肿瘤组织。5、无法做第二次活检。液体活检是指人体液中获取疾病信息的技术，循环肿瘤，ctDNA，CTC，外泌体。ctDNA:肿瘤细胞凋亡坏死后释放到血液中的游离DNA，CTC：肿瘤发生过程中由原发肿瘤脱落释放入外周血的肿瘤细胞。外泌体：含有能调控受体细胞活性的分子，如蛋白质、DNA、mRNA、miRNA、IncRNA等。作用：用药指导、预后监测、早期诊断。突变与甲基化。肿瘤个体化治疗-基因检测的必要性。ctDNA突变检测在靶向用药指导中的应用。试验设计：通过分析患者肿瘤中存在的基因突变，根据基因变异类型使用对应的靶向药物治疗。分析样本中143个基因中的4000变异类型。预计招募5000例患者至少25%的患者是罕见肿瘤。预计开展针对24个靶向药的子试验。ALK基因重排在NSCLC中的突变频率约为5-7%，融合基因。关心和指导的关注点。单一分子检测无法充分预测靶向药物疗效。肿瘤个体化治疗趋势：多基因检测。基于高通量测序的临床服务。篮子试验，没有弄清楚多少基因在产生作用。分析患者肿瘤存在的基因突变，进行靶向治疗。未来基于液体活检的基因检测，高通量测序带给我们学科的帮助。检测策略：单基因测序，二代测序，ARMS，数字PCR。未来液体活检，动态检测。组织与血液一致性研究结果。ctDNA甲基化在肿瘤的早期诊断和预后的作用。大肠癌标志物Septin9甲基化-大肠癌。右侧结肠弥补检测的不足。CTC（循环肿瘤细胞）免疫捕获法，过滤法，密度梯度离心，流式细胞检测法，微流控芯片。CTC叶酸受体检测-肺癌，技术不成熟。外泌体：是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡（30-150nm）,现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。外泌体在细胞间分子信息的交流中起着重要作用。参与调控免疫应答、凋亡。举例：250名胰腺癌患者的少量血清，GPC1 crExosde 可将胰腺癌、胰腺癌癌前病变及胰腺良性病变区分开来。水平能够反映胰腺癌的肿瘤负荷。高通量测序技术首次被写入呼吸相关指南——《中国成人医院获得性肺炎与呼吸相关性肺炎诊断和治疗指南（2018年版）》病原学结果的判定方法：包括涂片镜检、微生物培养、病原体病原检测及高通量测序等分子生物技术。
高通量测量技术在感染性疾病诊疗中的应用
宏基因组测序（mNGS）不基于培养，全部微生物组。应用mNGS准确、快速诊断脓毒症感染病原，mNGS在免疫缺陷病人作为一线诊断方法的评价。mNGS在不明原因脑炎诊断中应用推荐，mNGS在微生物诊断中的临床实践，敏感性高于传统培养50.7%vs35.2%，mNGS在ICU重症肺炎患者诊断和预后中的价值。病原体高通量测序临床适用症。美国FDA NGS感染病诊断应用指南。中国成人医院获得。ctDNA用药相关基因检测报告解析。变异注释，肺癌慢性疾病。靶向药物非常多。服务临床，走进临床，MDT团队。试验学科的理念，检验离不开临床，走向临床。高通量测序质控要求，有严格的质控体系。现在有指南，有卫生部质控标准，有空间要求。
IgG亚型检测及应用-IgG4相关性疾病-诊断标准2011
陈捷
免疫球蛋白是浆细胞合成和分泌的一组具有抗体活性、特异性结合抗原的蛋白质。IgG大约占循环免疫球蛋白总量75%。G1-G4。IgG亚类，免疫球蛋白缺乏，导致机体易发感染。儿童以IgG3缺陷为主，成人G2缺陷为主。IgG4相关性疾病，G4升高以及G4阳性细胞浸润，误诊为肿瘤，其实就是自身免疫性疾病。不易与肿瘤鉴别，对糖皮质技术治疗良好。自身免疫性胰腺炎（AIP）。米库利兹病，腺体肿大，G4升高。与干燥综合症鉴别。IgG4高于IgG，总IgG检测抗体主要针对G1和G2，G4检测G4。IgG4相关肾病。糖皮质激素如强的松，治疗敏感。
IgG4相关疾病——一个或多个器官或组织肿胀增大、伴硬化，似肿瘤性；大量淋巴细胞和IgG4阳性浆细胞浸润（IgG4 阳性浆细胞占浆细胞40%以上）；血清IgG4水平显著增高（>1350mg/L）唾液腺和泪腺——米库利兹病，肺——间质性肺炎，腹膜后间歇——腹膜后纤维化，肾——间质性肾炎
感染性病原快速诊断的临床应用 康梅
多重耐药菌的出现提出迫切的诊断需求，预计2050年，全球1000万人，亚洲473万人因AMR致死。遏制细菌耐药国家行动计划2016-2020。AMS抗菌药物管理团队。A完整细胞水平快速检测-涂片染色镜检。B蛋白质或抗原水平快速检测-MALDI-TOFMS原理，分析生物学标志物：核糖体蛋白质，核酸结合蛋白，冷休克蛋白。质谱开了一道窗，视野特别特别大。
微生物快速诊断技术-蛋白质或抗原水平：PCT，CRP，r干扰素。感染和炎症状态下的PCT：假阳性，假阴性。流感病毒抗原检测-标记免疫荧光法，胶体金法对标本有要求：痰液，鼻炎抽取物，鼻洗液或流感病毒培养物。侵袭性真菌感染血清学检测方法。葡聚糖，对热极为稳定，高压121度并不能使其灭活，在念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多。当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，BDG可从胞壁中释放出来，从而使血液及其他体液中含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫系统可将其清除。在浅部真菌感染中，(1-3)-b-D-葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。2008年欧洲版EORTC/MSG真菌感染诊疗指南推荐：脑脊液隐球菌抗原阳性作为隐球菌感染确诊的依据。区分感染和定植：血培养，肺泡灌洗液-常驻菌，经典菌，如结核，与阴性风度相比较。研究发现非感染人群PCT0.46（0.26-0.77） PCT2.1ng/ml,是否感染？即便是由于感染导致的PCT升高，它也不能告诉你感染部位和最可能的致病菌。
流式细胞术在免疫细胞检测中的应用及案例分析 蔡蓓
免疫细胞，淋巴样干细胞-获得性免疫。如何检测细胞-白细胞分化抗原。T淋巴细胞-3，4，8。B淋巴细胞-CD19，CD3或CD5。NK细胞-CD16，CD56任何一个阳。应用价值：淋巴细胞（T淋巴比例+B细胞比例+NK细胞比例=100%+-5%）。鞘液质量严重影响绝对计数结果影响不大。绝对技术较相对技术更优。美罗化（利妥昔单抗注射液）——与B淋巴细胞上的CD20结合，并引发B细胞的溶解。即复宁（兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白）——是一种作用于T淋巴细胞的选择性免疫抑制，基本原理是使淋巴细胞衰竭。
液态芯片技术及临床应用 陆小军
液态芯片技术，核心技术：bead，微球在生产过程中带上红色和红外两种染料。包被的微株LUminex200，核酸HPV分型，RVP，蛋白。液态芯片技术应用：HPV分型、HLA抗原基因分型、CF囊性纤维化、GPP胃肠道病原体组合、RVP呼吸道病毒组合、NeoPle 新生儿筛选、细胞色素酶P450 2D6 SNP。蛋白：肿瘤标志物、HLA抗体检测、细胞因子、细胞信号传导、转录因子、阿兹海默症、心肌标志物、抗体亚类鉴定、代谢标志物。
液态芯片在移植配型中的应用，液态芯片技术与HPV基因分型，液态芯片技术在其他领域的应用：抗核抗体15项、心肌标志物、呼吸道I gM10项，术前8项
自身免疫性疾病用药基因检测及案例分析 周燕虹
自身免疫病的病谱药物治疗方案：氨基水杨酸类，糖皮质激素，生物制剂，免疫抑制剂。我国因药物不良反应住院250万人。免疫抑制剂临床使用困惑。药物反应个体差异：受体，代谢，排泄不同。增加考虑患者的基因特征，实施个体化精准治疗。药物基因组学，近20年的发展。FDA对一线用药进行了药物基因组学355个，各国药物264个。A类：必须要做，华法林，蝶嘌呤等。B类：could be 硫柞嘌呤等。荧光分子杂交。巯基嘌呤类：中国人变异MAF0.11-0.17。
肿瘤标志物检测结果的分析与解读 张君龙
恶性肿瘤发病流行病学特征 水果摄入不足11.7%。基因变异，肿瘤细胞产生，肿瘤细胞增殖，实体肿瘤。肿瘤标志物的简介：新出现的或过度表达的抗原物质。1、肿瘤特异性抗原2、肿瘤相关性抗原。浓度与肿瘤进展、转移是否有关系。胃黏膜刺激治疗药物对CA724有影响。CA125新国标，NSE标本溶血会影响测定结果。评价疗效案例。1、CEA一个平台结果不一样，如何解释？抗原表位不同，同一平台动态。2、CA125新国标的参考值是针对哪个系统？罗氏系统。
自动阅片系统在自免肝中的应用
间接免疫荧光法IIF，人工判读耗时耗力。
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