BRDU全称为5-BrdU (Bromodeoxyuridine) ，产品专有：AbMole 目录号M6348，是一种核苷类似物，与胸腺嘧啶竞争性整合到DNA，用于增生细胞的检测。5-BrdU对癌细胞系和癌症干细胞数扩增诱导进行性，剂量响应抑制。在H9细胞和BJ纤维母细胞中，Bromodeoxyuridine改变细胞周期分布。BrdU稳定整合到DNA，因此可以用于细胞增殖和其他细胞过程的评估。在大鼠胶质瘤RG2肿瘤模型中，5-BrdU (Bromodeoxyuridine) (300 mg/kg, i.p. 或0.8 mg/ml, p.o.)显著减慢肿瘤形成。
那么BrdU细胞增殖检测实验到底要怎么做呢？以下我就来一步步说明：
一、制备试剂
首先用纯净水稀释 20X Wash Buffer 来配制 1X Wash Buffer。
然后用 Detection Antibody Diluent（绿色）按 1:100 的比例稀释 BrdU Detection Antibody，以配制 1X 检测抗体溶液。
然后用 HRP-linked Antibody Diluent（红色）按 1:100 的比例稀释 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody，以配制 1X HRP 标记二抗溶液。
最后用细胞培养基按 1:100 的比例稀释 BrdU，以配制 10X BrdU 溶液。
二、BrdU加入
接下来我们将细胞放入 96 孔板上，并与相应的检测物质进行孵育。一般的种子细胞数目为 2500–100000 个细胞/孔，具体取决于细胞生长率。一般的孵育时间为 1-72 小时。
添加配制的 10X BrdU 溶液到平板孔中，以获得 1X 的最终浓度。示例： 如需往培养板添加 100 µl 培养基，则每孔添加 10 µl 10X BrdU 溶液。
将细胞放入恒温器。一般的孵育时间为 1-24 小时。
去除培养基。如需悬浮细胞，则以 300 g 的离心力离心分离平板 10 分钟，随后去除培养基。
三、BrdU的检测
按 100 µl/孔添加 Fixing/Denaturing Solution，并将平板放在室温下 30 分钟。去除溶液。
按 100 µl/孔添加配制的 1X 检测抗体溶液，并将平板放在室温下 1 小时。去除溶液，平板用 1X Wash Buffer 洗涤 3 次。
按 100 µl/孔添加配制的 1X HRP 标记二抗溶液，并将平板放在室温下 30 分钟。去除溶液，平板用 1X Wash Buffer 洗涤 3 次。
添加 100 µl TMB Substrate。
室温孵育 30 分钟。
注意：仔细观察颜色变化，因为可能需要在 30 分钟的标准显色时间之前停止反应。
添加 100 µl STOP Solution。
读取在 450 nm 处的吸光度（要获得最佳读数，则建议在添加 STOP Solution 30 分钟内读取平板）。
http://www.abmole.cn/products/5-brdu.html
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