进入实验室的第一天,跟着师姐学习Real-time PCR实验,来检测目的基因在实验样本中的含量。
由于PCR仪一次能跑96个孔,故每次准备样本4对,6个目的基因的引物。
图片来源于网络看着师姐在EP管上详细地标注样本编号,实验日期等相关信息,然后细致地将八联管按1-8的方向摆放,连盖子都讲究没有标记的放在左端,有些不以为然,明明已经做好标记为什么还要这么强迫症似的讲究摆放方向?
图片来源于网络等到自己动手操作时,由于专注于加样,没能及时在盖子上做好标记,完成加样后一个不小心碰翻了手里的试管架,所有的样品管混到一起无法辨认,这才理解了师姐的用意:样品多,实验步骤繁杂琐碎,按固定的顺序可以避免突发情况。
小贴士:、
1. Real-timePCR是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。
2. 完成PCR扩增后,得到的数据一般通过2(-Delta Delta C(T))方法进行数据分析,得到目的基因的在样本中的表达情况。
图片来源于网络参考链接:
1. Real-time PCR
2. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method
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