终于开始自己的小实验了，然而最简单的实验都做不好说的就是我。以前做过的实验因为没有详细地记录protocol，现在还是没法独立完成，像是东西放在哪里、操作的一些细节还是要不停地问师姐……师姐已经发现我丢三落四的属性了qwq，今天也是一个不合格的实验室民工呢。
今天跑了PCR，自我感觉操作规范，但还是跑得乱七八糟。
内参组内差距远超0.5，值大约在17-20不等，师姐说正常值大概在13-17……桃子酱说加样没必要戳到底，戳到底的话枪头可能会带走一部分样品，下次我试试看两侧壁加样。
师姐说cDNA的原液跑出来比较好，但是桃子酱说可以稀释了qq看……这次是拿原液q的，结果很不理想TUT。还是要排除一下看看到底是什么问题才能继续下去啊……
今日看的文献：没看嘻嘻
今日解决的问题：
①、qPCR的溶解曲线有什么作用
A：用Syber Green方法做完PCR后,用来判断产物是否相对专一.反应结束后,逐渐加温.和Syber Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链,就不能在和Syber Green结合.一般每加温一度,读一次信号.当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离一下增多.曲线的横坐标是温度,而纵坐标是荧光信号的变化!开始加热,信号变化不大,所以几乎是平的,接近Tm时,突然变化加大,所以出现峰值.再升温,产物全部解离,就又是一条直线了.
如果有非特异性产物,在加热过程中就会出现一些比较矮,宽的峰.
总结：可以判断产物是否相对专一，跑PCR的时候别忘记加。今天忘记加了TUT。
②、AMPK各个亚基的差别，作为抗体购买指导。
α亚基是AMPK主要的活性亚基，也是ser-172磷酸化的亚基，因此不管是总AMPK还是pAMPK都买α亚基就行。已经下单cst的抗体~
③、mTOR是否炎症通路分子？AMPK可以抑制他，是否可以从这个通路抑制痛风炎症？
mTOR是一种丝/苏氨酸激酶，影响T细胞细胞因子表达、参与免疫抑制，调控细胞生长、凋亡等，在胰岛素抵抗、肿瘤等多种疾病中表达失调。其抑制剂已经应用于多种疾病如实体瘤、器官移植和类风湿性关节炎等疾病的治疗。主要参与细胞生长调控等，很难说是一个炎症通路分子，但是肯定与炎症有某种程度的相关性。
本来想是不是可以从这条线下去考虑AMPK通路和痛风的关系，但这个似乎有点悬，还是想想别的吧~如果真的要往代谢做下去那太可怕了TUT我到底还不是一个生科学生啊qaq
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