在实时 PCR 热循环过程中，本文采用 CCD 相机获取随时间变化的荧光图像，该荧光图像从 20uL 毛细管中的 PCR 混合物中获取。
该荧光检测系统由一个作为激发光源的发光二极管 ( LED, 470nm )，CCD 相机和一个带有六个光学滤光片的转盘组成，可在 530、560、610、640、670 和 710nm 处提供六个荧光检测通道用于多重实时 PCR DNA 定量。
本文采用包含 HBV SC 11 DNA 模板和 SYBR Green I 荧光标记染料的 PCR 混合物来验证仪器的性能。
目前，同时检测多个目标 DNA 序列已成为病毒或血液诊断的趋势。对一种血液样本中不同病毒的检测称为多重实时 PCR。
本文建立基于比尔-朗伯定律 (Beer-Lambert law) 的分析模型来预测随着 PCR 热循环过程中 DNA 浓度的增加而增加的荧光强度。
预测值可用作确定 PCR 混合物中 DNA 的初始拷贝数。可与通过信号滤波算法在 CCD 相机捕获的荧光图像上获得的结果做对比。
因 CCD 相机的噪声较大，所以本文采用自适应滤波器( LUM 算法 ) 来消除荧光图像中的光学噪声。
图 1
图 1 所示为热循环仪的详细介绍。该系统需在 95℃ 下孵育 10 min。
之后，每次热循环经历 3s 95℃ 变性，10s 53℃ 退火， 16s 72℃ 延伸 来扩增 DNA 片段。
图 2 所示，为仪器的荧光采集系统。详细信息可见论文。
图 2
参考文献
[1] Developmentof a CCD-based fluorimeter for real-time PCR machine.
--尧灵
--2021.05.24
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