1 15ml的摇菌管直接离心10000g（25000rpm） 1min tm。
2 倒掉上清液。
3 加入250ul solution 1/RNase A ，涡旋,吹打，颠倒，完全重悬沉淀，使其充分混匀。
4 将悬浮液移入1.5ml离心管中。
5 加入250ul solution2（轻，避免二氧化碳进入），反转与轻轻旋转tube几次后得到清澈的液体，此步骤持续2-3min。（不能超过5min）
6 加入350ul的solution3 ，立即倒转几次，指导形成白色絮状沉淀，
7 最大转速（大于13000g）for 10min，
8 将7号步骤中的上清液小心的移入柱子中，最大转速离心1min
9 倒掉收集管中的液体，
10 加500ul的HBC buffer到柱子中
11 最大转速离心1min
12倒掉收集管中的液体
13 加入700ulDNA wash buffer，最大转速，1min，倒掉收集管中的液体。
14：重复13步骤一次
15：空的柱子离心2min，最大转速，干燥15min'
16：柱子下换一个干净的ep管，加入50ulTAEbuffer（60℃预热），停留2min，15000转离心3min，测浓度，送测序。
测序：
保证浓度大于20ng/ul
15uldd水+3ul质粒DNA
如果样品过多，可以酶切鉴定后再去送测序：
酶切体系为：
10x mix：1ul
Clal：0.2ul
Kpn1：0.2
质粒DNA：4ul
dd水：4.6ul
37度1-2h孵育
（两个内切酶就是当初设计引物时，质粒上没有，但是目的基因上有的位点）
切后出现两条条带：比较小的是目的条带，大的是质粒条带，结合分子量大小与marker可以送检正确的克隆，看是否有突变，及其该突变是否会影响蛋白表达。
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