转化子与非转化子:感受态细胞中是否带有质粒?
重组子与非重组子:感受态细胞中是否带有重组质粒?
目的重组子与非目的重组子:重组质粒中的目的基因是否正确?
假阳性转化子:只接受了载体或者接受了不含目的基因的重组子的转化子。
目的重组子的筛选
1. 基于载体遗传标记的筛选与鉴定(表型筛选法):
载体表型选择法、插入基因的选择法
抗药性筛选法--抗生素
人工构建的基因工程载体,都带有一个或几个可选择的遗传标记基因或决定表型特征的基因,转化后的受体菌可在含有相应抗生素的培养基上正常生长,而不含此载体的DNA的受体菌就不能存活。
2. 基于目的基因序列的筛选与鉴定(核酸水平筛选):
PCR鉴定法、酶切法、测序法
从转化后的菌体克隆中分离质粒,电泳,比较其分子大小。
3. 基于目的基因表达产物的筛选与鉴定(蛋白质水平筛选法):
检测酶活性、分子大小
4. 基于报告基因的筛选与鉴定
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