构建侵染性克隆 (Bhat and Rao, 2020)
侵染性克隆是一个全长cDNA（FL-cDNAs）克隆，在合适启动子配合下可以在离体或活体条件下产生侵染性转录本。构建侵染性克隆是研究功能基因组学，病毒蛋白的复制和表达以及宿主与病毒相互作用的基础。另外，侵染性克隆还是抗病毒研究和新病毒载体研究的材料库。
主要有两种构建方法：
（1）利用T3，T7或SP6启动子（噬菌体的RNA聚合酶）体外转录。一些商品化的载体（比如promega的pGEM-T easy）就含有这类启动子
（2）另一类就是通过 cauliflower mosaic virus（CaMV）35S启动子实现体内转录。关于这个启动子的发现历史，有一篇文章已经介绍的很全面，我就不多说了（https://zhuanlan.zhihu.com/p/43940274）。
在找构建病毒侵染性克隆实验方法的时候，发现了一本写满methods and protocol的书（满意！）。这本书以植物病毒为例，介绍了详细的实验原理和方法。其中侵染性克隆的部分在449-463页，我刚刚上传到百度网盘，有需要的话可以下载。
Bhat, A.I., andRao, G.P. (2020) Development of Infectious Clone of Virus. In Characterization of Plant Viruses:Springer, pp. 449-463.
链接：https://pan.baidu.com/s/14S1VbRf8jgnaBjavAF0bdw
提取码：1bo3
一个构建的流程图
推荐读
与之相关的往期推送：
【现学现卖】构建具有侵染性的病毒克隆（主要是列举了几篇文献的构建思路，没有具体步骤）
网友评论